JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 5:13 min. • April 28th, 2025
Weźmy przystosowaną do ciemności, znieczuloną, transgeniczną, białooką muchę.
Mucha wyraża kanały jonowe TRPL oznaczone eGFP w fotoreceptorach oka.
W ciemności TRPL lokalizuje się na błonach rabdomore - mikrokosmkach fotoreceptorów.
Używając sprężonego powietrza, wepchnij muchę głową w dół do końcówki pipety.
Przytnij końcówkę i popchnij rozporek do tyłu.
Przytnij go ponownie i popchnij muchę do przodu, aż wystaje tylko jej głowa.
Unieruchamić końcówkę w modelance przyklejonej do szkiełka i umieścić ją na stoliku mikroskopu fluorescencyjnego, z okiem skierowanym promieniście w stronę obiektywu mikroskopu.
Dodaj kroplę wody do obiektywu, a następnie opuść ją, aż dotknie oka.
Zrób zdjęcia fotoreceptorów.
Zmierz intensywność fluorescencji w rabdomere, ciele komórki i tle.
Oświetl muchę pomarańczowym światłem, aby wywołać translokację TRPL do ciała komórki.
Powtórz pomiary obrazowania i fluorescencji.
Porównaj obrazy, aby zaobserwować zmniejszoną fluorescencję rabdomeralną po oświetleniu, wskazującą na translokację TRPL do ciała komórki.
Aby przygotować muchę w odmianie nieśmiertelnej, przenieś znieczuloną lodem muchę głową w dół do końcówki pipety o pojemności 200 mikrolitrów i ostrożnie popchn
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych