Generowanie trójwymiarowego sferoidalnego modelu inwazji komórek nowotworowych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:18 min. • April 28th, 2025
Weźmy hodowlę ludzkich komórek guza mózgu.
Treat za pomocą enzymu dysocjacyjnego, aby przerwać połączenia komórkowe, oddzielając zagregowane komórki.
Przemyj buforem, aby zatrzymać aktywność enzymów, a następnie dodaj pożywkę, aby utrzymać żywotność komórek.
Wprowadź metylocelulozę, środek zawieszający.
Przenieść zawiesinę do mikropłytki o okrągłym dnie i inkubować.
Lepka metyloceluloza utrzymuje komórki w zawieszeniu, promując interakcje komórka-komórka w celu agregacji w sferoidy.
Wymieszaj sferoidy z matrycą kolagenową, która naśladuje fizjologiczne środowisko zewnątrzkomórkowe.
Przenieś zawiesinę do mikropłytki i inkubuj, pozwalając matrycy na utworzenie żelu, który więzi sferoidy.
Dodaj podłoże wzrostowe na wierzch żelu.
Na peryferium sferoidalnym komórki nowotworowe tracą adhezję komórka-komórka i przyjmują fenotyp inwazyjny.
Te komórki wydzielają proteazy, które degradują matrycę, przedłużają wypukłości, aby się zakotwiczyć, i poruszają się naprzód, atakując matrycę.
Model sferoidalny wykazujący inwazję guza jest gotowy do analizy.
Aby wygenerować sferoidy guza o jednolitej wielkości, najpierw umyj interesującą hodowlę komórek nowotworowych 5 mililitrami PBS i potraktuj komórki 0,5 do
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych