JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:47 min. • April 28th, 2025
Zacznij od peptydów pochodzących z granulek neuromelaniny (NMG) wyizolowanych z pośmiertnej ludzkiej tkanki mózgowej.
NMG, znajdujące się w neuronach produkujących dopaminę, zawierają pigment neuromelaniny, białka i lipidy.
Weź kolumnę do wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC) zawierającą fazę stacjonarną na bazie krzemionki funkcjonalizowaną hydrofobowymi ligandami.
Załaduj peptydy do kolumny.
Peptydy hydrofobowe wiążą się z kolumną silniej niż hydrofilowe.
Przepuść bufor elucji przez kolumnę.
Mniej hydrofobowych peptydów wymywa się najpierw, podczas gdy więcej hydrofobowych wymywa się później.
Zdeluzowane peptydy wchodzą do źródła jonizacji elektrorozpylania spektrometru mas, gdzie są jonizowane do naładowanych jonów peptydowych.
Zjonizowane peptydy następnie trafiają do analizatora masy, gdzie są rozdzielane na podstawie ich stosunku masy do ładunku.
Wybrany jon peptydowy jest kierowany do komórki zderzeniowej i rozdrabniany na mniejsze jony, których stosunek masy do ładunku jest ponownie mierzony.
Na koniec, dane są porównywane z referencyjną bazą danych w celu zidentyfikowania białek obecnych w próbce NMG.
Po przeprowadzeniu trawienia tryptycznego, jak opisano w tekście, przygot
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych