JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:01 min. • April 28th, 2025
Rozpocznij od wielodołkowej płytki o płaskim dnie pokrytej matrycą błony podstawnej, która zawiera zewnątrzkomórkowy polimer i białka adhezyjne, które naśladują macierz mikrośrodowiska guza.
Wprowadź podłoże zawierające neurosferę komórek glejaka pochodzących z guza mózgu u dzieci, upewniając się, że jest ona umieszczona centralnie w studzience.
Matryca sprzyja przywiązaniu neurosfery do studni.
Dodaj odczynnik tłumiący tło, aby zminimalizować niespecyficzną fluorescencję.
Następnie wprowadź zielone przeciwciała anty-CD44 sprzężone z fluoroforem.
Przenieś płytkę do systemu obrazowania żywych komórek umieszczonego w inkubatorze, który utrzymuje fizjologiczne warunki komórki.
Z biegiem czasu komórki glejaka wyrażają białko adhezyjne CD44, które oddziałuje z białkami adhezyjnymi.
To aktywuje szlak sygnalizacji komórkowej i ułatwia migrację komórek z neurosfery.
Przeciwciała anty-CD44 sprzężone z fluoroforem wiążą się z ekspresją CD44 na komórkach glejaka, powodując ich fluoryzację.
Pojawienie się zielonych komórek fluorescencyjnych oddalających się od neurosfery potwierdza migrację komórek glejaka.
Gdy studzienki są pokryte BMM, wytnij końcówkę P200. Weź 50 mikrolitrów pożywki komórkowej i NS
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych