JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:38 min. • April 28th, 2025
Weź sferoidy guza neuroendokrynnego jelita cienkiego w probówce.
Dodaj roztwór utrwalający, aby zachować komórki.
Aby umyć, odwirować i zastąpić utrwalacz buforem.
Odwirować i wyrzucić supernatant, aby usunąć resztki utrwalacza
.Dodaj bufor zawierający detergent i środek blokujący, aby przepuszczalnie błony komórkowe i zapobiec wiązaniu się przeciwciał niespecyficznych.
Umyj buforem, aby usunąć nadmiar detergentu i środka blokującego.
Inkubuj z pierwotnymi przeciwciałami, które wiążą się z docelowym białkiem specyficznym dla komórki neuroendokrynnej.
Przemyć buforem, aby usunąć niezwiązane przeciwciała.
Dodaj przeciwciała drugorzędowe oznaczone fluoroforem, które wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi.
Spłukać buforem, aby usunąć nadmiar przeciwciał.
Dodaj podłoże montażowe zawierające barwnik, aby zabarwić jądro.
Przenieś sferoidy na szkiełko i zamontuj za pomocą szkiełka nakrywkowego.
Użyj mikroskopu fluorescencyjnego, aby uwidocznić komórki neuroendokrynne sferoidu wyrażające określone białka.
Napraw organoidy, dodając 500 mikrolitrów paraformaldehydu i inkubując je przez 15 minut. Po inkubacji przemyj kulturę dwukrotnie 1 mililitrem PBS. Dodaj 500 mikrolitrów PBS z 3% BSA i 0,1% Tri
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych