Pomiar wskaźnika zużycia tlenu w ostrych wycinkach mózgu myszy

Umieść stemple wycinków mózgu od zdrowych i neurodegeneracyjnych myszy na ekranach do przechowywania próbek.

Odwróć sitka i włóż je do płytki tkankowej.

Weź wstępnie skalibrowany wkład czujnika z sondami czujnika. Załaduj związki - pirogronian, oligomycynę, FCCP i antymycynę A - do portów iniekcyjnych.

Umieścić wkład na płytce tkankowej. Zainicjuj przebieg w analizatorze strumienia zewnątrzkomórkowego

.

Sondy mierzą wskaźnik zużycia tlenu w wycinku (OCR).

Przy pierwszym wstrzyknięciu pirogronian dostaje się do mitochondriów, wytwarzając nośniki elektronów.

Nośniki te przekazują elektrony do kompleksów I i II łańcucha transportu elektronów lub (ETC), inicjując reakcję przenoszenia elektronów, która zwiększa zużycie tlenu i OCR.

Oligomycyna hamuje kompleks V, zatrzymując syntezę ATP i zmniejszając OCR.

FCCP, protonofor, zaburza gradient protonów, zwiększając zużycie tlenu i OCR.

Antymycyna A wiąże się z kompleksem III i zatrzymuje ETC, minimalizując OCR.

Porównaj profile OCR.

Zmniejszony OCR w wycinkach neurodegeneracyjnych wskazuje na upośledzenie mitochondriów.

Odessaj jeden kawałek dziurkowanej tkanki mózgowej i ostrożnie umieść tkankę po siatkowej stronie ekranu przechwytywania. Okrągły kaw