Dlaczego testowanie hipotezy zerowej jest istotne dla walidacji celów modelu TNT?

Testowanie hipotezy zerowej w modelu TNT zapewnia, że obserwowane zachowania bólowe i tworzenie się neuromy są wynikiem konkretnych interwencji, a nie artefaktów proceduralnych, co stanowi wsparcie dla rzetelnej walidacji celów w badaniach nad bólem neuropatycznym.

W jaki sposób izolacja zmiennej niezależnej wpisuje się w schemat zabiegu TNT?

Izolowanie zmiennych, takich jak przecięcie nerwu i transpozycja podskórna, pozwala badaczom przypisać fenotypy bólu oraz rozwój neuromy bezpośrednio tym manipulacjom, co wyjaśnia ścieżki mechanistyczne w procesie badawczym.

Co umożliwiają ilościowe pomiary zmiennych zależnych w badaniach nad TNT?

Ilościowa ocena zachowań bólowych oraz cech histologicznych neuromy umożliwia obiektywne porównanie grup eksperymentalnych, co wspiera podejmowanie decyzji w oparciu o dane w przedklinicznych badaniach nad bólem.

Dlaczego wymagania dotyczące replikacji są krytyczne dla współpracy międzyfunkcyjnej w modelu TNT?

Replikacja protokołów chirurgicznych i behawioralnych zapewnia powtarzalność badań pomiędzy zespołami, co ułatwia wiarygodną wymianę danych oraz wspólny rozwój kandydatów na leki terapeutyczne w leczeniu bólu.

Jakie kompetencje w zakresie analizy statystycznej są wymagane przed wdrożeniem modelu TNT?

Do analizy danych behawioralnych i histologicznych niezbędne są solidne narzędzia statystyczne, aby zapewnić, że zaobserwowane efekty w modelu TNT są istotne i mogą służyć jako podstawa do podejmowania decyzji w obszarze badawczo-rozwojowym (R&D).

Generowanie szczurzego modelu transpozycji nerwiaka piszczelowego

JoVE Encyklopedia Eksperymentów

Neuronauka

0 wyświetleń • 4:42 min. • April 28th, 2025

Weźmy znieczulonego szczura z ogoloną jedną tylną nogą. Naciąć od połowy łydki do kostki, odsłaniając mięsień.

Proszę przeciąć warstwę tkanki łącznej, aby odsłonić nerw piszczelowy.

Stwórz podskórny tunel pod skórą. Przeciąć nerw, aby wywołać uraz.

Przeciągnij bliższy koniec przeciętego nerwu przez tunel i przyszyj go do dystalnego końca tunelu, ustawiając nerw podskórnie.

Zamknij nacięcie, oczyść obszar i pozwól szczurowi dojść do siebie.

Po przecięciu, nerw ulega degeneracji, gdy aksony i osłonki mielinowe ulegają rozpadowi.

Zdenerwowane komórki Schwanna uwalniają cząsteczki sygnałowe, które przyciągają makrofagi do usuwania zanieczyszczeń, po czym odcięty nerw wysyła aksonalne wyrostki w celu wspomagania regeneracji.

Bez odpowiednich struktur docelowych do reinerwacji, zdezorganizowane aksony tworzą nerwiaka, masę aksonów, komórek Schwanna, włókien kolagenowych i naczyń krwionośnych.

Regenerujące aksony uwalniają cząsteczki, które pobudzają pobliskie nocyceptory, neurony czuciowe sygnalizujące ból, prowadząc do sygnałów bólowych związanych z nerwiakiem.

Zlokalizuj kolano i delikatnie wykonaj podłużne nacięcie o długości od 2 do 3 centymetrów nad przyśrodkową stroną tylnej łapy od połowy łydki do kostki za pomocą skalpela. W razie potrzeby otwórz skórę i tkankę podskórną dalej za pomocą mikronożyczek, aż warstwy mięśni będą widoczne. Zidentyfikuj powierzchowny pęczek nerwowo-naczyniowy jako dwie do trzech białych, fioletowych lub czerwonych linii, które mogą swobodnie poruszać się po warstwach mięśni. Utrzymuj pęczek nerwowo-naczyniowy w stanie nienaruszonym. Wypreparuj tył z tej wiązki.

Następnie przeprowadź sekcję, aby otworzyć powięź pomiędzy mięśniami brzuchatymi łydki. Pomiędzy powięzią mięśni można znaleźć głębszy pęczek nerwowo-naczyniowy z nerwem piszczelowym, który jest około trzy razy większy niż powierzchowny pęczek nerwowo-naczyniowy. Użyj kości piszczelowej jako dodatkowego punktu orientacyjnego, ponieważ nerw piszczelowy leży tuż za kością piszczelową. Aby wypreparować nerw piszczelowy z otaczających go wiązek naczyniowych, tępo przesuń nerw piszczelowy i przetnij odsłoniętą tkankę, która wykazuje pewne rozciągnięcie podczas poruszania nerwem piszczelowym.

Gdy cały nerw piszczelowy zostanie odsłonięty, umieść warstwy mięśni z powrotem, aby uniknąć odwodnienia nerwu aż do rozwarstwienia skóry piszczelowej od mięśnia podskórnego. Aby wypreparować skórę piszczelową z podskórnej warstwy mięśniowej i wykonać tunel podskórny, przytrzymaj skórę i wepchnij końcówkę w tkankę równoległą do skóry, używając narzędzia do mikrochirurgii. Upewnij się, że koniec tunelu znajduje się przedpiszczelowo lub bocznie, aby ułatwić dostęp do obszaru do badania nerwiaka.

Po przecięciu nerwu piszczelowego na dystalnym końcu w pobliżu kostki, zmień powiększenie mikroskopu na 10x lub 16x i zidentyfikuj epineurium nerwu piszczelowego proksymalnie do cięcia wykonanego w pobliżu kostki, lub w przypadku bardziej proksymalnej bifurkacji nerwu piszczelowego, zidentyfikuj epineurium zarówno przyśrodkowej, jak i bocznej gałęzi podeszwowej proksymalnie do cięcia wykonanego w pobliżu kostki. Ostrożnie umieść 8-0 Nylonowy szew przez epineurium bliższego końca nerwu, przytrzymując epineurium pęsetą i umieszczając igłę między nerwem a epineurium z ugryzieniem około 0,5 milimetra.

Ugryź igłą podskórnie na końcu tunelu podskórnego i pociągnij szew, aby przetransponować nerw bocznie do tunelu podskórnego. Zamocuj szew, robiąc węzeł. Umieść grubszy szew 4-0 o ciemnym kolorze równo do utrwalonego końca nerwu bez wnikania w skórę. Upewnij się, że szew jest widoczny na zewnątrz skóry.

Sprawdź, czy nerw pozostaje na swoim miejscu po poruszeniu łapą i mięśniami. Odetnij końce szwu nieco dłuższym końcem szwu na bruździe niż na 8-0 szew. Zmień powiększenie mikroskopu z powrotem na 6x i zamknij skórę szwami śródnaskórkowymi za pomocą 8-0 szew. Delikatnie oczyść skórę 0,9% chlorkiem sodu za pomocą bawełnianego wacika.

Jeśli w pomieszczeniu jest zimno, umieść poduszkę grzewczą pod częścią czystej klatki i umieść szczura w klatce pod ręcznikiem papierowym w wygodnej pozycji. Zapewnij łatwy dostęp do jedzenia i wody.