JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:06 min. • April 28th, 2025
Weźmy chemicznie utrwaloną siatkówkę wyizolowaną z oka szczura.
Oko wykazuje wywołane ciepłem uszkodzenie rąbkowego splotu naczyniowego, sieci naczyń krwionośnych otaczających rogówkę.
To uszkodzenie blokuje drenaż płynów, zwiększając ciśnienie wewnątrzgałkowe (IOP) i powodując zwyrodnienie komórek zwojowych siatkówki (RGC).
Traktuj siatkówkę roztworem do przepuszczalności, aby przeniknąć komórkę i błony jądrowe.
Zastosuj roztwór blokujący, aby zapobiec niespecyficznemu wiązaniu przeciwciał.
Usuń rozwiązanie blokujące.
Wprowadź pierwotne przeciwciała, które celują w czynnik transkrypcyjny głównie wyrażany w RGC.
Umyć, aby usunąć niezwiązane przeciwciała.
Wprowadź przeciwciała drugorzędowe sprzężone z fluoroforem, które wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi.
Umyć, aby usunąć niezwiązane przeciwciała.
Przeciwbarwić jądra barwnikiem wiążącym DNA.
Umyj siatkówkę i zamontuj ją na szkiełku podstawowym za pomocą odpowiedniego medium montażowego.
Wizualizuj siatkówkę pod mikroskopem epifluorescencyjnym.
Zmniejszona gęstość komórek w uszkodzonym oku w porównaniu do kontroli potwierdza zwyrodnienie RGC spowodowane zwiększonym IOP.
Po wyizolowaniu siatkówki, przenieś je do 24-dołkowej płytki hodowl
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych