Indukcja łagodnego urazowego uszkodzenia mózgu w modelu mysim

Zabezpiecz znieczuloną, przygotowaną mysz w stereotaktycznej ramce z odsłoniętą czaszką.

Zidentyfikuj punkty odniesienia czaszki. Następnie umieść urządzenie podtrzymujące głowę pod głową zwierzęcia i napompuj je, aby zapobiec uszkodzeniu ucha.

Ustaw stereotaktyczny impaktor elektromagnetyczny nad głową.

Zresetuj współrzędne stereotaktyczne, aby precyzyjnie ustawić sondę impaktora nad celem. Przymocuj czujnik kontaktowy do ucha zwierzęcia.

Gdy sonda dotknie czaszki, cofnij ją. Ustaw żądaną głębokość uderzenia i zainicjuj uderzenie z odpowiednimi parametrami.

Sonda dostarcza kontrolowaną siłę do czaszki, indukując rozciąganie aksonów i ścinanie neuronów korowych, co prowadzi do łagodnego urazowego uszkodzenia mózgu.

Zmierz czas prostowania zwierzęcia, czas potrzebny do odzyskania normalnej pozycji ciała po urazie.

Oceń mysz pod kątem widocznych pęknięć czaszki.

Następnie wyjmij mysz z ramki, zamknij nacięcie i zastosuj antybiotyki.

Pozwól myszy na odzyskanie sprawności.

Umieść mysz w stereotaktycznej ramce za pomocą lekkiej żywicy acetalowej, zwężających się punktowych nauszników, paska do gryzienia i maski do znieczulenia myszy. Następnie uważnie monitoruj oddech myszy, aby zapewnić głębokość znieczulenia. Nałóż sterylny lubrykant do oczu na oczy, aby zapobiec wysuszeniu rogówki. Wysterylizuj skórę głowy wacikami z jodonu powidonu.

Po upewnieniu się, że znieczulenie jest głębokie, wykonaj około 1-centymetrowe nacięcie linii środkowej skóry głowy między oczami a szyją za pomocą skalpela, odsłaniając czaszkę. Pozostaw czaszkę do wyschnięcia na 1 do 2 minut, a następnie zidentyfikuj bregmę i lambdę. Następnie umieść aparat podtrzymujący głowę pod głową i napompuj bańkę wodą, aż zacznie naciskać na spód głowy myszy, ale nie odrywa głowy od pręta gryzienia.

Przesuń impaktor na miejsce nad głową myszy. Wysuń impaktor, umieszczając przełącznik wysuwania-chowania w pozycji wysuwania. Następnie ustaw impaktor w jednej linii, aż zostanie wyśrodkowany nad bregmą. Zresetuj cyfrowe współrzędne stereotaktyczne x i y w czytniku stereotaktycznym do 0. Następnie ustaw sondę w miejscu uderzenia, przesuwając sondę z bregmy do współrzędnych docelowych jako przyśrodkową boczną do 0 milimetrów i przednią tylną do minus 1,6 milimetra.

Kliknij czujnik kontaktowy do ucha myszy. Powoli opuść końcówkę sondy za pomocą przedłużonej sondy, aż do pierwszego kontaktu z powierzchnią. Zatrzymaj się na sygnale dźwiękowym. Następnie zresetuj cyfrowe stereotaktyczne współrzędne z w czytniku stereotaktycznym do 0.

Dokładnie sprawdź, czy końcówka jest równo z czaszką. Następnie wycofaj impaktor, umieszczając przełącznik na skrzynce sterowniczej w pozycji wycofania. Końcówka wycofuje się i nie ma już kontaktu z głową aż do momentu uderzenia. Ustaw głębokość uderzenia, dostosowując głębokość grzbietowo-brzuszną do minus 1,2 milimetra. Uważnie monitoruj oddech myszy, aby zapewnić głębokość znieczulenia i w razie potrzeby dostosuj poziom gazu.

Wywołaj efekt, naciskając prawy przełącznik, aby uderzyć. Końcówka sondy opada z wyświetlaną prędkością, pozostaje opuszczona przez ustawiony czas przebywania i chowa się. Uruchom stoper natychmiast po bliskim urazie głowy lub uderzeniu CHI, aby zarejestrować czasy prostowania. Średni czas refleksu prostującego wynosi od 5 do 15 minut.

Oceń mysz pod kątem widocznych złamań czaszki, krwotoków i bezdechu. Wyjmij mysz z ramki stereotaktycznej. Zamknij skórę głowy, zszywając skórę razem. Następnie na zamknięte nacięcie nałóż potrójną maść z antybiotykiem za pomocą sterylnego aplikatora z bawełnianą końcówką. Umieść mysz w czystej klatce w celu odzyskania danych.