JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:34 min. • April 28th, 2025
Weź szkiełko z komorą z jednowarstwową hodowlą mikronaczyniowych komórek śródbłonka mózgu szczura lub RBMEC.
Komórki są połączone białkami o ścisłym połączeniu połączonym z cytoszkieletem aktyny, naśladując warstwę śródbłonka bariery krew-mózg.
Zastąp podłoże odtlenionym podłożem wolnym od glukozy, a następnie umieść szkiełko w komorze hipoksji.
Niedostępność tlenu i glukozy hamuje syntezę ATP. Pozostałe ATP jest rozkładane na pochodne nukleotydów.
Zubożenie ATP hamuje pompowanie wapnia, podnosząc wewnątrzkomórkowy poziom wapnia, który aktywuje enzymy oksydoreduktazy.
Następnie uzupełnij pożywką natlenioną, a następnie umieść szkiełko w inkubatorze z tlenem. Aktywowane oksydoreduktazy wykorzystują ponownie wprowadzony tlen do degradacji pochodnych nukleotydów, wytwarzając reaktywne formy tlenu lub ROS.
ROS zakłóca interakcje między białkami połączeń ścisłych i indukuje szlaki sygnałowe, które przekształcają cytoszkielet aktynowy we włókna stresowe, osłabiając interakcje komórka-komórka.
Monowarstwa z zakłóconymi interakcjami międzykomórkowymi jest gotowa do analizy.
W ramach przygotowań skonfiguruj i skalibruj system hodowli komórek hipoksji zgodnie z instrukcjami producenta. Środowisko k
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych