JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 7:03 min. • April 28th, 2025
Umieść komórki neurosfery w buforze zawierającym detergenty, wapń i inhibitory proteazy.
Detergent przenika do komórek, podczas gdy inhibitor dezaktywuje proteazy, aby zachować białko docelowe związane z chromatyną.
Dodaj nukleazę i inkubuj. Nukleaza wykorzystuje wapń do trawienia chromatyny.
Dodaj bufor zawierający EDTA, który chelatuje wapń, inaktywując nukleazę.
Dodaj bufor do lizy komórek, uwalniając chromatynę.
Odwirować i zebrać supernatant.
Dodać przeciwciała specyficzne dla białka docelowego i inkubować z rotacją. Odwirować i usunąć supernatant.
Wprowadzić kulki magnetyczne skierowane do przeciwciała i inkubować z rotacją.
Dodaj bufor do lizy, aby oddzielić niespecyficznie związane DNA.
Magnetycznie uchwyć kulki i usuń supernatant.
Dodaj bufor o wysokiej zawartości soli, aby oddzielić niespecyficznie związane białka.
Magnetycznie uchwyć kulki i usuń supernatant.
Dodaj bufor stabilizacyjny, magnetycznie wychwytuj kulki i usuwaj zanieczyszczenia.
Ponownie zawiesić w buforze proteinazy-K w celu strawienia białek, uwalniając DNA.
Po zebraniu neurosfer odwiruj 1 razy 10 do 6 komórek neurosfery na immunoprecypitację w ilości 300 razy g przez 5 minut. Po odwirowaniu zdekantować supernatant i
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych