JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:31 min. • April 28th, 2025
Weźmy uwodnioną, osadzoną, utrwaloną i przepuszczalną w żelu fibrynowym chorą tkankę włóknisto-naczyniową pochodzącą od pacjenta. Tkanka ta zawiera nieregularne struktury neowaskularne z komórkami śródbłonka i perycytami.
Potraktuj tkankę roztworem blokującym, aby zapobiec wiązaniu się nieswoistych przeciwciał.
Inkubować z pierwszorzędowymi przeciwciałami skierowanymi przeciwko białkom powierzchniowym na komórkach śródbłonka i perycytach.
Przepłukać buforem w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał, a następnie inkubować w buforze.
Po przepłukaniu buforem inkubować z przeciwciałami drugorzędowymi sprzężonymi z barwnikiem fluorescencyjnym, aby związać się z przeciwciałami pierwszorzędowymi.
Przemyć buforem w celu usunięcia nadmiaru przeciwciał i inkubować w buforze.
Po przepłukaniu buforem dodaj barwnik jądrowy, aby wybarwić jądra komórkowe. Spłucz buforem i wodą dejonizowaną, aby usunąć niezwiązany barwnik.
Przenieś tkankę na szkiełko mikroskopowe.
Nałożyć media montażowe i uszczelnić szkiełkiem nakrywkowym zawierającym szybkoutwardzalne media montażowe.
Po wyschnięciu na powietrzu przechowuj szkiełko w niskiej temperaturze. Następnie zobrazuj tkankę pod mikroskopem epifluorescencyjnym, ab
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych