JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:11 min. • April 28th, 2025
Weź przekrój siatkówki myszy na siatce mikroskopu elektronowego. Sekcja zawiera komórki zwojowe siatkówki lub RGC, synaptycznie połączone z komórkami dwubiegunowymi.
Presynaptyczne komórki dwubiegunowe zawierają pęcherzyki neuroprzekaźników ułożone w strukturę wstęgową w pobliżu błony synaptycznej.
Postsynaptyczne RGC mają skupione receptory neuroprzekaźników na swojej błonie. Komórki te są znakowane podjednostką B lub CTB toksyny.
Przemyć buforem w celu utrzymania pH.
Inkubuj z buforem blokującym, aby zamaskować niespecyficzne miejsca wiązania.
Inkubować z pierwszorzędowymi przeciwciałami skierowanymi przeciwko receptorom neuroprzekaźników i CTB.
Przemyć buforem w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał i utrzymania pH.
Inkubować z przeciwciałami drugorzędowymi sprzężonymi z nanocząstkami złota o różnych rozmiarach, które wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi, znakując cząsteczki docelowe.
Usuń niezwiązane przeciwciała, a następnie wysusz próbkę na powietrzu.
Zastosuj metale ciężkie, które wiążą makrocząsteczki, zwiększając kontrast.
Za pomocą mikroskopii elektronowej zidentyfikuj RGC za pomocą znakowanych CTB i zlokalizuj znakowane receptory neuroprzekaźników.
Na tym etapie nal
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych