Ocena integralności bariery krew-mózg w szczurzym modelu uszkodzenia mózgu wywołanego laserem

Weźmy znieczulony szczur kontrolny i model szczura z laserowo wywołanym uszkodzeniem mózgu.

Aplikacja lasera na prawą półkulę uszkodziła komórki i barierę krew-mózg, czyli BBB, która oddziela krew od tkanki mózgowej.

Wstrzyknąć barwnik śledzący do kaniulowanej żyły ogonowej, która przechodzi przez krążenie ogólnoustrojowe, aby dotrzeć do mózgu.

Barwnik wiąże się z białkami osocza i przenika do tkanki mózgowej przez uszkodzoną barierę krew-mózg.

Uśmiercić szczury.

Przeprowadzić fuzję szczurów przez serce, aby usunąć barwnik z krążenia.

Wyodrębnij i pokrój mózg, wyizoluj wycinki z uszkodzonej półkuli i zhomogenizuj je.

Traktuj kwaśnym roztworem, aby zdenaturować białka, uwalniając barwnik związany z białkiem.

Odwirować i wyizolować supernatant zawierający barwnik. Dodaj alkohol, aby zwiększyć fluorescencję barwnika.

Przenieś roztwór na mikropłytkę. Po wzbudzeniu wyższa intensywność fluorescencji w uszkodzonym mózgu wskazuje na uszkodzenie BBB wywołane laserem.

Aby ocenić częstość uszkodzenia bariery krew-mózg, 24 godziny po urazie wywołanym laserem należy załadować strzykawkę 2% niebieskim barwnikiem Evansa, rozcieńczonym w 4 mililitrach na kilogram roztworu soli fizjologicznej i dostarczyć