Model minimalnego uszkodzenia rdzenia kręgowego do badania aktywacji i migracji nerwowych komórek macierzystych

Weź znieczuloną mysz i ogol jej grzbiet.

Zabezpiecz go w urządzeniu stereotaktycznym, ze zwiniętą gazą umieszczoną tak, aby podpierała kręgosłup piersiowy.

Zdezynfekuj skórę, wykonaj pionowe nacięcie linii środkowej i cofnij skórę.

Odłącz ścięgna mięśniowe od kręgosłupa piersiowego i wsuń je.

Zidentyfikuj docelowy kręg, a następnie odetnij stawy międzykręgowe, aby go usunąć.

Odsłoń rdzeń kręgowy i włóż zgiętą igłę po obu stronach linii środkowej.

Wprowadzenie igły powoduje powierzchowne uszkodzenia w istocie białej, zewnętrznej warstwie rdzenia kręgowego zawierającej wiązki aksonów, pozostawiając jednocześnie nienaruszony kanał centralny.

Usuń igłę, a następnie zszyj mięśnie i skórę.

Uszkodzone komórki uwalniają sygnały, które aktywują komórki odpornościowe rezydujące w tkance, które z kolei aktywują nerwowe komórki macierzyste lub NSC, otaczające kanał centralny.

Aktywowane NSC migrują do miejsca urazu, wspomagając naprawę tkanek.

Przed rozpoczęciem zabiegu użyj maszynki do strzyżenia włosów, aby usunąć sierść z grzbietu znieczulonej myszy od połowy pleców do szyi i uszu. Po zabezpieczeniu myszy w urządzeniu stereotaktycznym umieść cztery do pięciu kawałków zwiniętej gazy pod brzuchem, lekko pociągając za podstawę ogona, aby wyprostować ciało i kręgosłup.

Popchnij gazę piersiową z brzucha myszy w kierunku górnej części klatki piersiowej, aby podeprzeć kręgosłup piersiowy. I użyj taśmy laboratoryjnej, aby zabezpieczyć ogon i kończyny w orientacji przypominającej gwiazdę. Po zdezynfekowaniu odsłoniętej skóry sekwencyjnymi wacikami z 70% etanolu i jodu powidonu, za pomocą ostrza skalpela numer 10 wykonaj pionowe nacięcie równoległe do osi podłużnej zwierzęcia, od środka obu łopatek do krzywizny kręgosłupa piersiowego.

Cofnij skórę, aby odsłonić tkankę miękką i kontur kręgosłupa oraz zidentyfikuj dolną granicę poduszeczki tłuszczowej nadłopatkowej. Następnie użyj skalpela, aby ostrożnie, ale mocno przeciąć wzdłuż obu stron kości kręgów od T5 do T8 i 9, aby odłączyć ścięgna mięśni pleców od kręgosłupa. Zmień położenie retraktorów tak, aby zęby retraktorów zostały włożone w miejsce nacięcia po obu stronach kręgosłupa i rozszerz każdy retraktor, aby dostosować ekspozycję, aż kręgosłup będzie wystarczająco podniesiony, bez zbytniego obciążania cofniętych warstw mięśni.

Pod mikroskopem chirurgicznym ostrożnie oczyść resztki mięśni i innych tkanek miękkich pokrywających kręgosłup, aby odsłonić kość kręgową, obejmując wyrostek kolczysty kręgów ząbkowanymi kleszczami i przesuwając kleszcze lekko w górę iw dół, aby zidentyfikować kręgi, które zostaną usunięte. Następnie włóż jedną końcówkę pary zakrzywionych, nożyczek po obu stronach odsłoniętego otworu międzykręgowego, doogonowo do blaszki kręgowej, która ma zostać wycięta, i przetnij obustronnie łączące stawy międzykręgowe. Następnie podnieś blaszkę do góry i odetnij górny przyczep blaszki, aby wyizolować i usunąć kość.

Podczas odcinania i usuwania blaszki kręgowej należy zawsze uważać, aby zawsze kierować nożyczki do góry, aby nie uszkodzić leżącego pod spodem rdzenia kręgowego.

Z żyłą grzbietową linii środkowej służącą jako punkt orientacyjny, włóż zgięty pod kątem 45 stopni trzon końcówki igły o rozmiarze 30 skośnie do góry, na głębokość 1 milimetra w grzbietowo-boczną powierzchnię rdzenia kręgowego i około 0,5 milimetra w bok po obu stronach linii środkowej. Przesuń igłę o około dwa milimetry od kierunku ogonowego do rostralnego, tak aby cała długość skosu była włożona w sznurek. Następnie odtwórz ścieżkę wejścia, aby usunąć igłę.

Aby zamknąć ranę, zdejmij retraktor i użyj szwu wchłanialnego A 6-0, aby połączyć mięśnie pleców po obu stronach urazu wzdłuż linii środkowej, oraz jedwabnego szwu 4-0, aby zamknąć leżącą nad nim skórę.