JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:56 min. • April 28th, 2025
Zacznij od chemicznie utrwalonego wycinka mózgu naczelnych innych niż człowiek.
Utrwalacz na bazie aldehydu sieciuje białka, zachowując strukturę tkanki, ale pozostawia pewne reaktywne reszty aldehydu.
Umyć, aby usunąć warstwę krioprotektantu otaczającą część tkanki.
Dodaj środek redukujący, aby zneutralizować reaktywne grupy aldehydowe, wytwarzając produkty uboczne reakcji.
Umyć, aby usunąć te produkty uboczne i nadmiar środków redukujących.
Zastosuj roztwór blokujący, aby zapobiec wiązaniu się nieswoistych przeciwciał.
Dodaj pierwszorzędowe przeciwciała skierowane przeciwko białku ulegającemu ekspresji w określonych miejscach błony neuronalnej.
Przemyć, aby usunąć niezwiązane przeciwciała.
Dodaj biotynylowane przeciwciała drugorzędowe skierowane przeciwko przeciwciałom pierwszorzędowym.
Przemyć, aby usunąć niezwiązane przeciwciała.
Nałożyć kompleksy awidyna-biotyna-peroksydaza, które wiążą się z przeciwciałami drugorzędowymi.
Umyj ponownie, aby usunąć niezwiązane kompleksy.
Wprowadzić podłoże chromogenne wraz z nadtlenkiem wodoru. W obecności nadtlenku wodoru enzym peroksydaza utlenia substrat, tworząc brązowe osady.
Rozpocznij od przeniesienia 50-mikronowych odcinków mózgu naczelnych utr
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych