JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:36 min. • April 28th, 2025
Zrób slajd z zatopionymi w parafinie sekcjami neurosfer guza mózgu, skupiskami nerwowych komórek macierzystych wykazujących specyficzne dla nowotworu biomarkery białka jądrowego.
Podgrzej, aby stopić parafinę, usuń ją za pomocą ksylenu i ponownie nawodnij tkankę za pomocą zmniejszających się stężeń alkoholu.
Podgrzej w kwaśnym buforze zawierającym detergent, aby zdemaskować epitopy na biomarkerach i przeniknąć przez błony komórkowe.
Spłucz, a następnie potraktuj środkiem utleniającym, aby dezaktywować endogenne enzymy peroksydazy, zapobiegając niespecyficznym sygnałom.
Zastosuj rozwiązanie blokujące, aby zamaskować niespecyficzne miejsca wiązania.
Inkubuj z pierwszorzędowymi przeciwciałami skierowanymi na epitopy biomarkerów.
Spłucz, a następnie potraktuj przeciwciałami drugorzędowymi sprzężonymi z biotyną, które wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi.
Spłucz i inkubuj z awidyną sprzężoną z peroksydazą, która wiąże się z biotyną.
Dodaj substrat chromogeniczny i środek utleniający.
Peroksydaza wykorzystuje czynnik do przekształcania substratu w kolorowe osady, oznaczając lokalizację biomarkera.
Przeciwbarwić jądra, odwodnić tkankę w alkoholu i zamontować szkiełko do obrazowania rozkład
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych