Wsteczne znakowanie neuronów ruchowych Drosophila za pomocą fluorescencyjnych barwników lipofilowych

Zacznij od wypreparowanego zarodka Drosophila przymocowanego do szkiełka z taśmą wokół niego.

Neurony ruchowe muchy są fluorescencyjnie oznaczone do wizualizacji.

Używając mikroskopu, wizualizuj zarodek i umieść w pobliżu zarodka zielono-fluorescencyjną mikropipetę wypełnioną lipofilowym barwnikiem.

<p style='margin-left:36pt; wyrównanie tekstu:justowanie;" >Następnie przełącz się w tryb fluorescencji i zlokalizuj końcówkę aksonalną neuronu ruchowego w połączeniu nerwowo-mięśniowym, gdzie neuron ruchowy łączy się z mięśniem.

Przełącz na tryb jasnego pola, zetknij pipetą końcówkę docelowego aksonu, uwolnij kroplę barwnika, a następnie inkubuj.

Ze względu na ich lipofilową naturę i bliskość aksonów, barwniki selektywnie wnikają w bogatą w lipidy błonę docelowego aksonu.

Z biegiem czasu barwnik przemieszcza się wstecz, cofając się wzdłuż aksonalnej dwuwarstwy lipidowej w kierunku ciała neuronalnego, oznaczając projekcje neuronalne.

Usuń taśmę ze szkiełka i umieść szkiełko nakrywkowe.

Obserwuj slajd pod mikroskopem konfokalnym.

<p style='margin-left:36pt; wyrównanie tekstu:justowanie;" >Neuron docelowy oznaczony wstecznie pojawia się w zielonej fluorescencji, wykazując szczegółową morfolo