Obrazowanie konfokalne ruchu mitochondriów w oligodendrocytach w organotypowych kulturach wycinków mózgu

Rozpocznij od konfiguracji komory kąpielowej mikroskopu konfokalnego z krążącym roztworem obrazowania i kontrolowaną temperaturą.

Weź hydrofilową membranę polimerową zawierającą organotypowy wycinek mózgu myszy, w którym oligodendrocyty zostały transdukowane w celu ekspresji specyficznego dla mitochondriów białka czerwonej fluorescencji i specyficznego dla cytozolu białka zielonej fluorescencji.

Podwójna fluorescencja pozwala na wyraźną wizualizację dynamiki mitochondriów w cytozolu oligodendrocytu.

Zanurz plaster w środku wanny i zabezpiecz go kotwicą harfy.

Obniż obiektyw i wybierz zdrowy oligodendrocyt do skanowania.

Dostosuj moc lasera, aby zminimalizować toksyczność komórek i fotowybielanie.

Ustaw parametry mikroskopu, a następnie zapisz obrazy poklatkowe fluorescencyjnie znakowanych mitochondriów.

Przechwytuj obrazy z-stack na różnych głębokościach, aby uzyskać trójwymiarowy widok całej komórki w wysokiej rozdzielczości.

Przetwarzaj obrazy, aby uwidocznić ruch mitochondriów w oligodendrocytach.

Użyj kleszczyków, aby przenieść konfetti z plasterkiem z szalki Petriego na wierzch wanny. Następnie umieść dwie końcówki kleszczy po każdej stronie konfetti tak, aby dotykały konfetti bez do