JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:54 min. • April 28th, 2025
Zacznij od sekcji mózgu myszy odsłaniających grzbietowy hipokamp, bogaty w neurony.
Dodaj nadtlenek wodoru, aby stłumić aktywność peroksydazy neuronalnej, a następnie umyj.
Traktuj buforem przepuszczalności, a następnie zastosuj bufor blokujący, aby zablokować niespecyficzne wiązanie.
Dodaj przeciwciała pierwszorzędowe i inkubuj z mieszaniem. Przeciwciała te wiążą się z białkami markerowymi aktywacji neuronów.
Umyj i nałóż przeciwciała drugorzędowe sprzężone z biotyną, aby związać przeciwciała pierwszorzędowe.
Spłucz i wprowadź kompleks awidyna-biotyna-peroksydaza, który wiąże się z biotyną na koniugatach.
Umyj ponownie, a następnie dodaj podłoże chromogenne, które jest utleniane przez peroksydazę, aby wytworzyć brązowy osad. Zatrzymaj reakcję za pomocą PBS.
Przenieś sekcje na szkiełko pokryte żelatyną i odwadnij je za pomocą zwiększających się stężeń etanolu. Następnie oczyść sekcje z ksylenu i zamontuj je.
Umieść szkiełko pod mikroskopem jasnego pola.
Pod wpływem światła, niebarwione obszary przepuszczają światło i wydają się jasne, podczas gdy wybarwione neurony pochłaniają i odbijają światło i wydają się ciemniejsze.
Wyraźny ciemniejszy obszar wskazuje na aktywację neuronów w hipoka
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych