JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:19 min. • May 29th, 2025
Zacznij od oczyszczonej tkanki hipokampa myszy, która staje się optycznie przezroczysta poprzez usunięcie lipidów. Tkanka jest osadzona w siatce hydrożelowej w celu stabilizacji biomolekuł i zachowania struktur komórkowych.
Tkanka zawiera astrocyty wyrażające czerwone białko fluorescencyjne i neurony pobudzające wyrażające zielone białko jądrowe, co umożliwia wyraźną wizualizację.
Umieść tkankę na szkiełku i stwórz komorę za pomocą gorącego kleju, pozostawiając niewielką szczelinę.
Zastosuj roztwór dopasowujący współczynnik załamania światła, aby nawodnić tkankę i zapobiec pęcherzykom, a następnie uszczelnij szkiełkiem nakrywkowym.
Wypełnij komorę roztworem dopasowującym współczynnik załamania światła, aby zmniejszyć rozpraszanie światła i zamknąć szczelinę.
Wizualizacja tkanki za pomocą mikroskopu dwufotonowego.
Światło bliskiej podczerwieni wzbudza czerwone i zielone białka fluorescencyjne w płaszczyźnie ogniskowej, umożliwiając obrazowanie w wysokiej rozdzielczości przy minimalnym fotouszkodzeniu. Emisje fluorescencji są wykrywane oddzielnie, co wyraźnie ujawnia przestrzenną bliskość między astrocytami a jądrami neuronów pobudzających.
Najpierw umieść próbkę na środku szkiełka. Z
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych