Jednoczesne obrazowanie dynamiki mikrogleju i aktywności neuronalnej u wybudzonej myszy

Zacznij od transgenicznej myszy zabezpieczonej w stereotaktycznej ramie, z okienkiem czaszkowym wszczepionym na jej korę wzrokową.

Mysz wykazuje ekspresję EGFP w mikrogleju i R-CaMP, czerwonym fluorescencyjnym wskaźniku wapnia, w neuronach kory wzrokowej.

Umieść mysz pod mikroskopem dwufotonowym i wyreguluj soczewkę obiektywu, aby ustawić ostrość na powierzchni mózgu.

Przesuń mysz z ramką stereotaktyczną od soczewki obiektywu i zamocuj urządzenie zacieniające.

Napełnij urządzenie zacieniające wodą i ustaw mysz pod mikroskopem.

Przykryj soczewkę czarną folią.

Urządzenie zacieniające i folia blokują zakłócenia światła zewnętrznego, zapewniając dokładne obrazowanie.

Umieść monitor LCD przed okiem myszy, aby zapewnić stymulację wizualną.

Ustaw parametry obrazowania i rozpocznij obrazowanie.

Stymulacja wzrokowa wyzwala pobudzenie neuronów, co prowadzi do napływu wapnia i wzrostu fluorescencji R-CaMP.

Tymczasem mikroglej wycofuje swoje procesy podczas interakcji z aktywowanymi neuronami, co obserwuje się za pomocą obrazowania na żywo.

Aby zainstalować wykonane na zamówienie urządzenie zacieniające i monitor LCD do stymulacji wizualnej, najpierw ustaw soczewkę tak, aby skupiała się na powierzch