JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 6:00 min. • May 29th, 2025
Weźmy wycinki mózgu hipokampa od szczura, któremu wstrzyknięto bromodeoksyurydynę lub BrdU, nukleozydowy analog tymidyny.
BrdU integruje się z DNA podczas podziału komórki, znakując nowo wygenerowane neurony w zakręcie zębatym, regionie neurogenezy.
Inkubuj ze środkiem utleniającym, aby dezaktywować endogenne enzymy peroksydazy.
Potraktuj kwasem, aby zdenaturować DNA i odsłonić BrdU, a następnie zneutralizować kwas.
Inkubować z detergentem w celu przepuszczalności błon komórkowych i roztworem blokującym w celu zamaskowania niespecyficznych miejsc wiązania.
Inkubować z pierwszorzędowymi przeciwciałami skierowanymi przeciwko BrdU, a następnie z przeciwciałami drugorzędowymi znakowanymi peroksydazą specyficznymi dla przeciwciał pierwszorzędowych.
Wprowadź chromogenny substrat i środek utleniający, umożliwiając peroksydazie przekształcenie substratu w kolorową pozostałość.
Zamontuj tkankę i przeciwbarwić barwnikiem wiążącym kwas nukleinowy.
Odwodnić tkankę, a następnie potraktować ją, aby zwiększyć przezroczystość.
Pod mikroskopem zidentyfikuj zakręt zębaty.
Korzystając z techniki frakcjonowania optycznego, przeanalizuj wiele płaszczyzn w poprzek grubości tkanki, aby określić ilościowo neurony
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych