JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:39 min. • May 29th, 2025
Zacznij od larwy danio pręgowanego zawierającej znakowane fluorescencyjnie komórki międzynerwowe lub INMC, zamontowanej na szkiełku nakrywkowym i umieszczonej pod mikroskopem konfokalnym.
INMC to komórki progenitorowe o zdolnościach regeneracyjnych, które zostały wcześniej poddane ablacji laserowej.
Najpierw obserwuj uszkodzony obszar w trybie fluorescencji. Brak fluorescencji potwierdza udaną ablację laserową.
Następnie użyj trybu obrazowania w świetle przechodzącym, aby zbadać uszkodzony obszar, w którym komórka wydaje się ziarnista i spuchnięta z nieregularnymi jądrami, potwierdzając śmierć komórki.
Rekrutacja makrofagów do tego miejsca wskazuje na aktywną odpowiedź komórkową na uraz.
Teraz przełącz się z powrotem na tryb fluorescencji i rób zdjęcia poklatkowe w regularnych odstępach czasu, aby monitorować regenerację.
W fazie odzyskiwania INMC rozszerzają projekcje w lukę, ułatwiając zamknięcie i promując naprawę komórkową.
Zapisz te obrazy szeregów czasowych do analizy. Ponowne pojawienie się wyraźnej fluorescencji w obszarze po ablacji potwierdza pomyślną regenerację komórek.
Aby zobrazować ciała komórek po ablacji, w menu Kanały odznacz ścieżkę DAPI, aby dezaktywować laser abla
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych