JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:19 min. • May 29th, 2025
Umieść chemicznie utrwalony plasterek mózgu myszy w naczyniu ze szklanym dnem zawierającym bufor i zabezpiecz go siatką.
Podłącz elektrodę wypełnioną anionowym, hydrofilowym barwnikiem fluorescencyjnym do źródła napięcia.
Włóż elektrodę uziemiającą do bufora, aby zakończyć obwód elektryczny.
Korzystając z oświetlenia jasnego pola, przesuń elektrodę wypełnioną barwnikiem w kierunku plasterka.
Przełącz się na obrazowanie różnicowe z interferencją kontrastową w podczerwieni, aby zlokalizować astrocyt.
Przebij somę astrocytów elektrodą, aby uzyskać dostęp do cytoplazmy.
Zastosuj prąd elektryczny, aby wprowadzić barwnik do cytoplazmy za pomocą jonoforezy.
Przełącz się na mikroskopię konfokalną, aby monitorować ruch barwnika.
Barwnik hydrofilowy, niezdolny do przejścia przez błonę hydrofobową, dyfunduje w cytoplazmie, wypełniając somę i gałęzie.
Po napełnieniu ogniwa zatrzymaj prąd i wycofaj elektrodę.
Poczekaj, aż błona astrocytów ponownie się uszczelni.
Pobieraj obrazy w różnych płaszczyznach Z i rekonstruuj je, aby zobrazować morfologię astrocytów.
W teście wstrzykiwania barwnika delikatnie umieść lekko utrwalony plasterek mózgu w naczyniu ze szklanym dnem wypełnionym 0,1 molowym PBS w temperat
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych