JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:53 min. • May 29th, 2025
Weźmy szkiełko nakrywkowe z posiewem neuronów brzusznego śródmózgowia pochodzących z zarodków myszy.
Komórki są zakażone wektorem wirusowym w celu ekspresji wskaźnika wapnia.
Przenieść szkiełko nakrywkowe do komory rejestracyjnej mikroskopu konfokalnego z buforem rejestrującym.
Korzystając ze światła widzialnego, zidentyfikuj region zawierający wiele neuronów, a następnie przełącz się na obrazowanie fluorescencyjne.
Przy niskich wewnątrzkomórkowych poziomach wapnia wskaźnik pozostaje niezwiązany, wykazując niską intensywność fluorescencji.
Wewnętrzne właściwości neuronów generują spontaniczne potencjały czynnościowe, wywołując otwieranie kanałów wapniowych bramkowanych napięciem i umożliwiających napływ wapnia.
Nadmiar wapnia wiąże się ze wskaźnikiem, wywołując zmianę konformacyjną, która zwiększa intensywność fluorescencji.
Rejestruj intensywność fluorescencji w czasie, aby śledzić spontaniczną aktywność wapnia.
Wprowadź neuroprzekaźnik o wysokim stężeniu, który wiąże się z receptorami na neuronach, generując ciągłe potencjały czynnościowe.
Ciągła aktywacja kanału wapniowego bramkowanego napięciem przedłuża napływ wapnia, powodując trwały wzrost intensywności fluorescencji.
Przygotuj 1 li
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych