JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:14 min. • May 29th, 2025
Zacznij od wycinków mózgu z neurodegeneracyjnego modelu myszy.
Inkubuj z dodatkiem detergentu roztworu blokującego, aby zwiększyć przepuszczalność tkanek i zablokować niespecyficzne wiązanie. Wyrzuć roztwór.
Wprowadzić przeciwciała pierwszorzędowe skierowane przeciwko blaszkom beta-amyloidu. Inkubować z mieszaniem, aby przeciwciała oddziaływały z blaszkami beta-amyloidu, a następnie umyć.
Dodaj przeciwciała drugorzędowe znakowane czerwonym fluoroforem i inkubuj w ciemności, aby umożliwić interakcję przeciwciał.
Przemyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał, a następnie przepłukać alkoholem.
Dodaj kurkuminę, która wiąże amyloidy bogate w beta-arkusze z wysokim powinowactwem, a następnie umyj.
Następnie potraktuj zwiększonym stężeniem alkoholu, odwadniając sekcje mózgu. Dodaj ksylen, aby usunąć wszelkie ślady odczynników.
Zamontuj wycinek na szkiełku i obserwuj pod mikroskopem fluorescencyjnym.
Użyj lasera o długości fali 590 nm, aby wzbudzić czerwone fluorofory na przeciwciałach drugorzędowych. Uchwyć obraz.
Przełącz się na laser o długości fali 480 nm, aby wzbudzić kurkuminę, emitując zieloną fluorescencję.
Nałóż obrazy; kolokalizacja czerwonej i zielonej fluorescencji potwierdza pł
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych