JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 6:41 min. • May 29th, 2025
Weź stały gruby wycinek mózgu od myszy zarażonej wirusem wścieklizny.
Wirus infekuje neurony i replikuje się, w wyniku czego białka wirusowe są obecne w komórkach.
Traktuj detergentem, aby przeniknąć przez błony komórkowe i roztworem blokującym, aby zamaskować niespecyficzne miejsca wiązania.
Inkubować z pierwszorzędowymi przeciwciałami skierowanymi przeciwko białkom wirusa, a następnie z przeciwciałami drugorzędowymi sprzężonymi z fluoroforem, które wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi.
Potraktuj fluorescencyjnym barwnikiem wiążącym kwasy nukleinowe, aby oznaczyć jądro.
Odwodnić tkankę w rosnącym stężeniu alkoholu, a następnie zastosować roztwór oczyszczający, aby zwiększyć przezroczystość tkanki do obrazowania.
Zamontuj sekcję w komorze obrazowania, napełnij ją roztworem czyszczącym i zamknij.
Za pomocą konfokalnej laserowej mikroskopii skaningowej zobrazuj tkankę oddzielnie za pomocą etykiet fluorescencyjnych, a następnie połącz je, aby utworzyć dwuwymiarowy obraz.
Uzyskuj obrazy w różnych płaszczyznach ogniskowych w tkance i łącz je, aby wygenerować trójwymiarową reprezentację do oceny postępu infekcji.
W celu barwienia immunologicznego skrawków tkanki mózgowej należy myć próbk
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych