JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:38 min. • May 29th, 2025
Weź komórki wyizolowane z nerwów kulszowych myszy i zwojów korzenia grzbietowego lub DRG.
Inkubuj z przeciwciałami znakowanymi fluoroforem przeciwko CD45 i CD11b oraz z przeciwciałami znakowanymi biotyną przeciwko MHC klasy II, aby oznaczyć komórki odpornościowe.
Inkubować ze streptawidyną znakowaną fluoroforem, która wiąże się z biotyną.
Leczyć utrwalaczem, aby ustabilizować strukturę komórkową.
Wprowadź bufor przepuszczalny z fluorescencyjnym barwnikiem DNA, aby przeniknąć błony i oznaczyć jądra.
Za pomocą cytometru przepływowego przepuść komórki przez wiązkę laserową, aby ocenić charakterystykę optyczną i fluorescencyjną.
Usuń agregaty o wyższej fluorescencji DNA, aby wyizolować pojedyncze komórki i wykryć fluorescencję z markerów.
Zidentyfikuj komórki wykazujące ekspresję CD45, charakterystycznego markera komórek odpornościowych, potwierdzając ich obecność.
Większość komórek CD45-dodatnich w DRG wykazuje ekspresję CD11b i MHC klasy II, co wskazuje na komórki podobne do mikrogleju, których nie ma w nerwach kulszowych.
Technika ta uzupełnia obrazowanie do analizy heterogeniczności komórek odpornościowych w tkankach nerwowych.
W komputerze wybierz odpowiednie kanały do wykrywania interesu
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych