JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:19 min. • May 29th, 2025
Zacznij od sekcji tkanki mózgowej myszy zawierającej obszar zainteresowania w buforze w celu utrzymania nawodnienia podczas obrazowania.
Tkanka jest pozyskiwana z mysiego modelu choroby Alzheimera, któremu wstrzyknięto metoksy X04, barwnik fluorescencyjny.
Methoxy X04 specyficznie wiąże się z β-plisowanymi strukturami arkuszy w blaszkach amyloidowych i zachowuje swoją fluorescencję do obrazowania i analizy.
Za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego z filtrem UV wzbudz methoxy-X04 i uchwyć emitowaną fluorescencję, aby uwidocznić fluorescencyjnie znakowane blaszki amyloidowe na otaczającej tkance.
Bez regulacji stolika mikroskopu uchwyć obrazy tego samego obszaru w trybie jasnego pola, aby szczegółowo określić strukturę tkanki i w trybie fluorescencji, aby uwidocznić blaszki.
Dopasuj obrazy w jasnym polu i obrazy fluorescencyjne za pomocą oprogramowania do przetwarzania obrazu, aby precyzyjnie odwzorować blaszki na strukturach anatomicznych.
Obrazy te zapewniają szczegółową wizualizację blaszek amyloidowych w ich kontekście strukturalnym w celu zbadania patologii choroby Alzheimera.
Za pomocą stereotaktycznego atlasu mózgu myszy wybierz sekcje mózgu zawierające interesujący Cię obszar i umieść każdą sekcję w krioprotektancie w studzience z 24-dołkową płytką hodowlaną. Następnie za pomocą jednorazowej pipety dodaj kroplę PBS na szkiełko mikroskopowe, a następnie umieść wycinek na kropli.
Zbadaj przekrój pod mikroskopem fluorescencyjnym, aby zidentyfikować obszary zawierające blaszki A-beta znakowane metoksy-X04. Nie przesuwając stolika mikroskopu, uchwyć obrazy interesujących obszarów w jasnym polu, a także w trybie fluorescencji. Każdy obraz musi przedstawiać ten sam region w obu polach, aby skorelować płytkę nazębną z obszarem strukturalnym przekroju tkanki.
Zapisz i nazwij zrobione zdjęcia zgodnie z numerem zwierzęcia. Zapisz również numer studzienki na tabliczce i pole wykonanych zdjęć. Po zakończeniu obrazowania umieść sekcję z powrotem w wyznaczonej studzience. Zbadaj następną sekcję w sekwencji, stosując tę samą procedurę, aby uniknąć wysuszenia sekcji.
Aby wyrównać obrazy, otwórz obrazy jasnego pola i pola UV, aby uzyskać ten sam zwrot z inwestycji na obrazie J. Następnie użyj wtyczki Mosaic J, aby wyrównać krawędzie dwóch obrazów. Zapisz wyrównany i połączony obraz zgodnie z numerem studni w folderze z numerem konkretnego zwierzęcia. Połącz obrazy z różnych sekcji tego samego zwierzęcia, aby zidentyfikować i zlokalizować blaszki w obszarze zainteresowania.