JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:16 min. • May 29th, 2025
Weźmy hodowlę komórek prekursorowych oligodendrocytów (OPC), wyizolowanych z mózgu młodego szczura, które zostały indukowane do różnicowania się w oligodendrocyty. Komórki są utrwalone w celu zachowania architektury komórkowej.
Zróżnicowane oligodendrocyty wyrażają zasadowe białko mieliny lub MBP, marker dojrzałych oligodendrocytów, podczas gdy zarówno OPC, jak i zróżnicowane komórki wyrażają czynnik transkrypcyjny oligodendrocytów 2 lub Olig2.
Zastosuj roztwór blokujący przepuszczalność i inkubuj z mieszaniem, przepuszczalnie przenikając błony komórkowe i blokując niespecyficzne miejsca wiązania.
Dodać przeciwciała pierwszorzędowe skierowane do markerów i inkubować z mieszaniem, aby umożliwić wiązanie.
Przemyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał, a następnie dodać różne przeciwciała drugorzędowe sprzężone z fluoroforem specyficzne dla przeciwciał pierwszorzędowych i inkubować z mieszaniem.
Umyj komórki, a następnie umieść je w systemie obrazowania z podwójną fluorescencją.
Użyj światła o określonych długościach fal, aby wzbudzić wyraźne fluorofory i wykryć emitowane sygnały, aby uwidocznić markery.
Zidentyfikuj zróżnicowane oligodendrocyty eksprymujące olig2 i MBP wśród niezróżni
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych