JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:31 min. • May 29th, 2025
Zacznij od komory obrazowania zawierającej unieruchomiony eksplant mózgu Drosophila zanurzony w buforze w celu utrzymania funkcji komórkowych.
Neurony w mózgu wyrażają cytoplazmatyczne fluorescencyjne wskaźniki wapnia, które wiążą się z jonami wapnia i fluoryzują.
Umieść komorę obrazowania pod mikroskopem fluorescencyjnym wyposażonym w soczewkę zanurzoną w wodzie.
Opuść soczewkę i przy oświetleniu w jasnym polu skup się na mózgu.
Przełącz się w tryb fluorescencji i uchwyć obraz.
Następnie wprowadź neuropeptyd do bufora i rozpocznij nagrywanie poklatkowe.
Neuropeptyd wiąże się ze swoim receptorem na neuronach, wyzwalając sygnalizację wewnątrzkomórkową. Otwiera to kanały wapniowe i umożliwia napływ jonów wapnia.
Te jony wapnia wiążą się ze wskaźnikami i zwiększają intensywność fluorescencji.
Ponownie uchwyć obraz po stymulacji neuropeptydem.
Porównaj obrazy przed i po stymulacji neuropeptydami.
Wzrost intensywności fluorescencji po stymulacji neuropeptydem odzwierciedla odpowiedź mózgu Drosophila na sygnalizację neuropeptydową.
Aby uzyskać obrazy fluorescencji wapnia, umieść komorę obrazowania zawierającą eksplant mózgu pod mikroskopem. Opuść soczewkę obiektywu, aż dotknie PBS. A w jasnym polu
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych