Obrazowanie mitochondriów neuronalnych za pomocą seryjnego skaningowego mikroskopu elektronowego typu block-face

Weź przycięty, zatopiony w żywicy fragment tkanki mózgowej myszy zawierający hipokamp.

Sekcja jest barwiona metalami ciężkimi w celu zwiększenia kontrastu pod mikroskopem elektronowym.

Zamontuj sekcję na aluminiowym kołku za pomocą kleju cyjanoakrylowego.

Pokryj boki bloku koloidalną pastą ze srebra, aby stworzyć przewodzącą ścieżkę do aluminiowego kołka.

Zbadaj blok tkankowy za pomocą seryjnego skaningowego mikroskopu elektronowego (SBFSEM).

W SBFSEM ultramikrotom sekwencyjnie kroi blok na ultracienkie warstwy, podczas gdy wiązka elektronów o niskim napięciu skanuje odsłoniętą powierzchnię.

Detektor elektronów wstecznie rozproszonych rejestruje obrazy 2D o wysokiej rozdzielczości, odsłaniając mitochondria i otaczające je struktury komórkowe.

Za pomocą odpowiedniego oprogramowania dostosuj jasność i kontrast, aby poprawić klarowność obrazu.

Wyrównaj sekwencyjne obrazy, aby zrekonstruować objętość 3D tkanki mózgowej. Ta rekonstrukcja 3D umożliwia precyzyjne mapowanie morfologii mitochondriów, rozmieszczenia przestrzennego i ich relacji w przedziałach neuronalnych.

Przytnij próbki do obszaru zainteresowania i zamontuj je na aluminiowym kołku za pomocą żelującego kleju cyjanoakrylowego. N