JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:33 min. • May 29th, 2025
Zacznij od zestawu perfuzyjnego umieszczonego na stoliku mikroskopu odwróconego.
Zespół perfuzyjny zawiera wypreparowany nerw obwodowy zabezpieczony między szkiełkiem nakrywkowym a zjeżdżalnią mikroakweduktu z ciągłą perfuzją soli fizjologicznej.
Mielinizowane aksony nerwu wyrażają zielone neurofilamenty znakowane fluoroforem.
Korzystając z oświetlenia jasnego pola, skup się na mielinizowanych aksonach.
Przełącz się na tryb konfokalny, fotowybielacz z dużą mocą lasera, a następnie uchwyć obraz referencyjny o niskiej autofluorescencji przy użyciu niskiej mocy lasera.
Narysuj równoległe linie wzdłuż aksonu, aby określić długość okna fotoaktywacji. Użyj tego jako przewodnika, aby utworzyć prostokątny obszar aktywacji.
Oświetl ten obszar określoną długością fali, aby aktywować zielone neurofilamenty oznaczone fluoroforem, powodując ich fluorescencję. Uzyskaj obraz.
Po aktywacji uchwyć zdjęcia poklatkowe.
Z biegiem czasu fluorescencyjne neurofilamenty poruszają się w obu kierunkach i rozprzestrzeniają się na sąsiednie obszary.
Pojawienie się fluorescencji w obszarach flankujących przylegających do obszaru aktywacji potwierdza transport neurofilamentów.
Chwyć bliższy koniec nerwu i powoli połóż g
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych