JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:54 min. • May 29th, 2025
Zabezpiecz unieruchomioną transgeniczną Drosophilę z głową wystawioną w komorze rejestracyjnej na stoliku mikroskopu fluorescencyjnego.
Ciało grzyba muchy składa się z neuronów wyrażających wrażliwe na wapń bioluminescencyjne białko fuzyjne, które jest aktywowane przez wstępnie załadowany kofaktor.
Podłącz rurkę perfuzyjną do komory. Zlokalizuj fluorescencyjne ciała grzybów, skupiając się na kielichu i płatach przyśrodkowych. Potwierdź drenaż za pomocą bufora. Ustaw
parametry obrazowania i skup się na kielichu i płatach przyśrodkowych. W ciemności należy uzyskać podstawowe obrazy fluorescencyjne ciał grzybów przed ekspozycją na stymulant.
Perfuzja nikotyny w buforze zawierającym wapń w celu aktywacji nikotynowych receptorów acetylocholiny, wyzwalając napływ wapnia i emisję światła bioluminescencyjnego.
Przemyć buforem, aby przywrócić warunki wyjściowe
.Perfuzja chlorku potasu w celu depolaryzacji neuronów, wyzwalając wewnątrzkomórkowe uwalnianie wapnia i emisję sygnału bioluminescencyjnego.
Przemyć buforem, aby przywrócić warunki wyjściowe
.Analizuj obrazy, aby ocenić przestrzenną i czasową aktywność wapnia w kielichu i płatach przyśrodkowych.
- Następnie umieść próbkę na uchwycie pod
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych