Obrazowanie żywych komórek migracji jądrowej gleju Mullera podczas regeneracji siatkówki danio pręgowanego

Zacznij od osadzonego w agarozie eksplantatu grzbietowej siatkówki transgenicznego danio pręgowanego, zamontowanego we fluorodywie z pożywką.

Siatkówka wykazuje uszkodzenie fotoreceptorów wywołane światłem i zawiera komórki glejowe Mullera lub MGC z jądrami eksprymującymi GFP.

Umieść naczynie w komorze mikroskopu wielofotonowego.

Korzystając z oświetlenia jasnego pola, skup się na siatkówce.

Przełącz w tryb fluorescencji, aby zlokalizować MGC.

Skonfiguruj stos z od warstwy komórek zwojowych lub GCL do zewnętrznej warstwy jądrowej lub ONL.

Rozpocznij obrazowanie na żywo.

Uszkodzone fotoreceptory uwalniają TNF-α, aktywując MGC.

Jądra MGC migrują zasadniczo w wewnętrznej warstwie jądrowej lub INL w celu replikacji swojego DNA.

Następnie jądra migrują wierzchołkowo do ONL, aby przejść mitozę, wytwarzając neuronalne komórki progenitorowe.

Po mitozie jądra MGC i komórki progenitorowe migrują zasadniczo z powrotem do INL.

Komórki progenitorowe namnażają się, migrują do miejsca urazu i różnicują się w fotoreceptory, umożliwiając regenerację siatkówki.

Przeanalizuj przechwycone obrazy, aby zobrazować migrację jądrową.

W oprogramowaniu do akwizycji obrazów otwórz okna A1 MP GUI, TiPad, A1 Compact GUI i