JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:18 min. • June 17th, 2025
Weźmy pierwotne neurony korowe gryzoni hodowane na powlekanym naczyniu ze szklanym dnem zawierającym pożywkę.
Komórki te wyrażają genetycznie zakodowane białko związane z ALS i bioczujnik wapnia.
Zastąp pożywkę buforem o niskiej zawartości chlorku potasu.
Inkubuj w celu utrzymania spoczynkowej aktywności neuronalnej i wyjściowego poziomu wapnia.
Zamontuj naczynie na stoliku mikroskopu konfokalnego i ustaw rurkę perfuzyjną.
Korzystając z oświetlenia jasnego pola, skup się na neuronach, a następnie przełącz się na obrazowanie fluorescencyjne.
Za pomocą lasera mikroskopu wzbudz bioczujnik i zarejestruj emisję fluorescencji, aby określić wyjściowy wewnątrzkomórkowy poziom wapnia.
Następnie przetocz naczynie buforem o wysokiej zawartości chlorku potasu.
Wysokie stężenie potasu depolaryzuje neurony, otwierając kanały wapniowe bramkowane napięciem na końcach presynaptycznych. Umożliwia to napływ wapnia, który inicjuje aktywność synaptyczną neuronów.
Zwiększony wewnątrzkomórkowy wapń wiąże się z biosensorem, powodując zmianę konformacyjną, która wzmacnia fluorescencję.
Kontynuuj rejestrowanie fluorescencji, aby mierzyć zmiany wewnątrzkomórkowego poziomu wapnia w czasie rzeczywistym, ujawniając aktyw
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych