JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:06 min. • June 17th, 2025
Zacznij od znieczulonych transgenicznych larw danio pręgowanego w komorze montażowej zawierającej natleniony bufor fizjologiczny pod mikroskopem stereoskopowym.
Móżdżek w mózgu zawiera genetycznie zmodyfikowane neurony Purkinjego wyrażające fluorescencyjne białka cytoplazmatyczne.
Usuń nadmiar pożywki, a następnie dodaj stopioną agarozę, aby unieruchomić larwy w celu stabilnego obrazowania.
Ustaw larwy grzbietową stroną do góry, aby uwidocznić móżdżek.
Po zestaleniu odetnij nadmiar agarozy. Za pomocą szklanej igły wytnij pigmentowaną skórę pokrywającą mózg, aby ją odsłonić.
Odwróć blok agarozy do komory obrazowania zawierającej stopioną agarozę do obrazowania pod odwróconym mikroskopem.
Dodaj bufor fizjologiczny, aby zachować funkcje neuronów.
Umieść komorę pod odwróconym mikroskopem konfokalnym. Zastosuj światło wzbudzenia do wzbudzenia białek fluorescencyjnych, umożliwiając wizualizację znakowanych neuronów.
Pigmentowane komórki skóry, jeśli nie zostaną usunięte, rozpraszają i pochłaniają światło wzbudzające, zmniejszając intensywność fluorescencji.
Usuwanie skóry poprawia przenikanie światła, aby zwiększyć intensywność fluorescencji, ułatwiając wizualizację neuronów.
Aby osadzić larwę, u
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych