JoVE Encyclopedia of Experiments
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 6:41 min • January 15th, 2026
Zacznij od pacjenta płci męskiej z azoospermią, stanem, w którym w nasieniu brakuje męskich gamet lub plemników.
Obszar narządów płciowych jest dezynfekowany i przykrywany serwetą, aby odsłonić tylko mosznę, narząd, w którym znajdują się jądra, które produkują plemniki.
Oświetl obszar i zidentyfikuj najądrza, strukturę odpowiedzialną za dojrzewanie i przechowywanie plemników.
Wprowadzić strzykawkę zawierającą specjalistyczny roztwór hodowlany gamet do tkanki najądrza.
Zastosuj podciśnienie podczas nakłuwania tkanki, aby wydobyć płyn najądrza zawierający plemniki.
Przenieś zebrany płyn do naczynia zawierającego roztwór hodowlany, aby zachować żywotność plemników.
Za pomocą mikroskopu policz dojrzałe, zdrowe plemniki, które wykazują ruchliwość.
Przenieś roztwór do probówki, a następnie odwiruj w celu oddzielenia plemników i usunięcia supernatantu.
Ponownie zawiesić komórki w świeżym roztworze hodowlanym.
Wyizolowane plemniki są już gotowe do wykorzystania w zabiegach leczenia niepłodności.
Na początek zbierz pakiet narzędzi chirurgicznych, dwie strzykawki, roztwór dezynfekujący, sterylne gumowe rękawiczki i opatrunek samoprzylepny. Sprawdź opakowanie narzędzi chirurgicznych, które zostało poddane sterylizacji parowej pod wysokim ciśnieniem, pod kątem uszkodzeń. Umieść opakowanie na stole instrumentalnym i otwórz zewnętrzną warstwę. Następnie poproś andrologów, aby założyli sterylne gumowe rękawiczki.
Otwórz wewnętrzną warstwę opakowania narzędzi chirurgicznych i sprawdź, czy taśma wskaźnika sterylizacji jest prawidłowa sterylizacja. Następnie przygotuj dwie strzykawki o pojemności 5 mililitrów wyposażone w igły o pojemności 0,7 mililitra do znieczulenia i operacji. Otworzyć bańkę zawierającą lidokainę do wstrzykiwań. Użyj sterylnej strzykawki o pojemności 5 mililitrów, aby odessać roztwór lidokainy i usunąć pęcherzyki powietrza ze strzykawki.
Teraz ułóż przygotowanego pacjenta na stole operacyjnym w pozycji litotomii. Po zdjęciu spodni zabezpiecz górną część ubrania powyżej pępka, aby całkowicie odsłonić krocze i dolną część brzucha poniżej pępka. Następnie dostosuj kąt lampy bezcieniowej, aby oświetlić mosznę pacjenta.
Użyj owalnych kleszczyków, aby chwycić sterylną kulkę z gazy. Całkowicie zanurz kulkę z gazy w roztworze dezynfekującym. I zdezynfekuj skórę, zaczynając od dolnej części brzucha i przesuwając się w kierunku przodu i wewnętrznej strony ud, okolicy krocza, penisa i moszny. Następnie umieść sterylny kwadratowy ręcznik pod pośladkami pacjenta. Rozłóż sterylny ręcznik przytrzymujący wokół obszaru operacyjnego, całkowicie odsłaniając mosznę w całym obszarze.
Za pomocą sterylnej pipety Pasteura przenieś około 2 mililitry roztworu kulturowego G-MPOS-PLUS do naczynia hodowlanego. Po zamknięciu pokrywy dostarczyć naczynie pielęgniarce na sali operacyjnej przez okienko transferowe. Teraz połóż naczynie hodowlane na sterylnym ręczniku na stole z instrumentami i otwórz pokrywkę.
Za pomocą kolejnej strzykawki o pojemności 5 mililitrów odessać około 0,2 mililitra roztworu hodowlanego G-MPOS-PLUS i usunąć pęcherzyki powietrza. Następnie lewą ręką przytrzymaj mosznę pacjenta, zabezpieczając najądrza, które wymaga nakłucia. Zbadaj palpacyjnie najądrze prawą ręką, aby potwierdzić lokalizację nakłucia chirurgicznego.
Następnie, za pomocą 5-mililitrowej strzykawki zawierającej roztwór hodowlany G-MPOS-PLUS w prawej ręce, nakłuć prostopadle do skóry do tkanki najądrza. Utrzymując podciśnienie, wielokrotnie nakłuwaj tkankę najądrza, aby płyn mógł dostać się przez igłę, a następnie wyjmij igłę do nakłuwania.
Wstrzyknąć wyekstrahowany płyn najądrza do naczynia hodowlanego. Następnie odessać pobliski roztwór hodowlany G-MPOS-PLUS, aby przepłukać strzykawkę, aby zmaksymalizować ilość pobranego płynu najądrza. Teraz przenieś szalkę hodowlaną zawierającą płyn hodowlany G-MPOS-PLUS i płyn najądrza do technika laboratorium zarodków przez okienko transferowe.
Umieść naczynie hodowlane na stoliku odwróconego mikroskopu optycznego i zabezpiecz je. Włącz wyłącznik zasilania mikroskopu i odpowiednio wyreguluj natężenie światła. Następnie obróć konwerter odwróconego mikroskopu optycznego. Wybierz 10-krotny obiektyw obiektywowy i obróć spirale z grubą i dokładną ostrością, aby wyregulować ogniskową.
Po zlokalizowaniu plemników najądrzy obserwuj je w 40-krotnym powiększeniu, aby ocenić liczbę i jakość. Za pomocą sterylnej pipety Pasteura przenieś płyn z naczynia hodowlanego do 15-mililitrowej probówki wirówkowej po zaobserwowaniu wystarczającej ilości aktywnych plemników. Umieść probówkę wirówkową na tacy balansowej i użyj probówki wirówkowej o tej samej specyfikacji, zawierającej sterylną wodę, aby wyrównać.
Następnie otwórz drzwiczki wirówki. Umieść rurki w gnieździe karty symetrycznie i zamknij drzwiczki. Naciśnij przycisk Start, aby rozpocząć proces wirowania. Po zakończeniu procesu wyjmij probówkę zawierającą płyn najądrza z wirówki. Następnie delikatnie odessać supernatant sterylną pipetą Pasteura i wyrzucić pobrany supernatant.
Za pomocą sterylnej pipety Pasteura przenieś osad z dna probówki wirówkowej do nowej probówki wirówkowej zawierającej około 2 mililitry roztworu hodowlanego G-IVF Plus. Delikatnie odpipetować roztwór, aby dokładnie zawiesić osad. Przenieś około 0,5 mililitra roztworu hodowlanego G-IVF Plus do probówki wirówkowej. Delikatnie przedmuchaj plemniki najądrza na dnie, aby dokładnie je zawiesić, i użyj ich do zabiegu ICSI.