JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:15 min. • June 17th, 2025
Zacznij od żywego eksplantatu siatkówki myszy po urodzeniu zamontowanego na filtrze membranowym i umieszczonego w komorze inkubacyjnej pod mikroskopem konfokalnym.
Siatkówka jest transfekowana w celu ekspresji białka fluorescencyjnego w błonach interneuronów amakrynowych gwiazdotwórczych.
Umieść wstępnie zwilżoną próbkę masy na siatkówce, aby ją ustabilizować.
Napełnij komorę buforem.
Utrzymuj optymalny przepływ buforowy i temperaturę w komorze, aby zachować żywotność neuronów.
Umieść obiektyw zanurzony w wodzie w komorze obrazowania.
Rozpocznij obrazowanie epifluorescencyjne.
Światło lasera, skierowane przez obiektyw, wzbudza białko fluorescencyjne w komórkach amakrynowych.
Emitowana fluorescencja jest wychwytywana przez ten sam obiektyw, co pozwala na wizualizację znakowanych komórek amakrynowych.
Zidentyfikuj jaskrawo fluorescencyjną komórkę do obrazowania.
Ustaw parametry obrazowania.
Przechwytuj obrazy w wielu płaszczyznach Z, aby uzyskać wizualizację 3D pełnej morfologii dendrytycznej.
Wykonaj obrazowanie poklatkowe, aby śledzić zmiany w morfologii dendrytycznej w czasie.
Zmontować komorę inkubacyjną do obrazowania na żywo i napełnić ją natlenionym aCSF. Włącz pompę i regulator temperatu
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych