JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:15 min. • August 7th, 2025
Weźmy genetycznie zmodyfikowane szczenię myszy z kasetą STOP po bokach loxP, która blokuje ekspresję czerwonego białka fluorescencyjnego lub RFP.
Zabezpiecz szczeniaka na specjalnie wykonanej ramie stereotaktycznej i przykryj go lodem, aby utrzymać znieczulenie.
Zdezynfekuj skórę głowy i oznacz lambdę jako punkt odniesienia.
Ustawić igłę do wstrzykiwań zgodnie ze współrzędnymi prążkowia względem lambda i nakłuć czaszkę.
Cofnij igłę do powierzchni czaszki, a następnie włóż ją na docelową głębokość.
Wstrzyknąć wektor wirusowy zmieszany z barwnikiem do prążkowia w kontrolowanej szybkości. Wektor koduje białka zielonej fluorescencji lub GFP i rekombinazę Cre.
Powoli wyjmować igłę, aby zapobiec cofaniu się roztworu.
Usuń szczenię i pozwól na odzyskanie.
W komórkach prążkowia wirus uwalnia swój genom, umożliwiając ekspresję rekombinazy Cre i GFP. Cre wycina kasetę STOP z bokami loxP, aktywując wyrażenie RFP.
Jednoczesna ekspresja GFP i RFP potwierdza udaną manipulację genami.
Umieść szczeniaka z rękawicą w tacce na głowę i połóż trochę pokruszonego lodu wokół lateksowego rękawa, aby utrzymać znieczulenie hipotermią. Następnie wyszoruj głowę szczeniaka 70% etanolem i zlokalizuj punkt orientacyjny
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych