JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:06 min • August 7th, 2025
Weźmy probówkę do mikrowirówki zawierającą czynnik wzrostu nerwów lub NGF, białko neurotroficzne, i protaminę, dodatnio naładowane białko nośnikowe.
Kompleksy protaminowe z NGF poprzez oddziaływania elektrostatyczne, które ułatwiają enkapsulację i zapobiegają degradacji.
Do szklanej fiolki dodaj etanol zawierający lipidowe substancje pomocnicze, które naśladują skład lipidowy lipoprotein o dużej gęstości lub HDL w celu tworzenia nanocząstek.
Wymieszać z dodatkowym etanolem, aby uzyskać równomierną dyspersję. Odparuj etanol pod azotem, aby utworzyć cienki film lipidowy.
Dodaj ultraczystą wodę i homogenizuj z dużą prędkością, aby umożliwić samoorganizację w prototypowe nanocząstki naśladujące HDL.
Wprowadź kompleks NGF-protamina do nanocząstek i inkubuj, mieszając, aby promować enkapsulację protaminy NGF, zachowując jednocześnie ich bioaktywność.
Schłodzić zawiesinę w celu stabilizacji nanocząstek, a następnie dodać apolipoproteinę A-I, główne białko strukturalne HDL, i kontynuować mieszanie, aby zintegrować białko ze strukturą nanocząstek.
Te naładowane NGF nanocząstki naśladujące HDL są teraz gotowe do dalszych badań.
Na początek wymieszaj 10 mikrolitrów NGF z 10 mikrolitrami protaminy USP w 1,5 mililitrowej probówce do mikrowirówki i odstaw na 10 minut w temperaturze pokojowej, aby utworzyć kompleks. Następnie dodaj 59 mikrolitrów fosfatydylocholiny i 11 mikrolitrów sfingomieliny do szklanej fiolki.
Dodaj również 4 mikrolitry fosfatydyloseryny, 15 mikrolitrów oleinianu cholesterolu i 45 mikrolitrów bursztynianu glikolu tokoferylowo-polietylenowego. Wymieszaj i odparuj etanol pod delikatnym strumieniem azotu przez około pięć minut. Wszystkie substancje pomocnicze powinny tworzyć oleisty, cienki film na dnie szklanej fiolki.
Dodaj 1 mililitr ultraczystej wody do fiolki i homogenizuj przy 9,500 obr./min przez 5 minut w temperaturze pokojowej, aby utworzyć prototypowe nanocząstki lub NP. Następnie dodać przygotowany kompleks do prototypowych nanocząsteczek. Zawiesinę inkubować w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 30 minut, mieszając, używając małego mieszadła w szklanej fiolce.
Ostudzić MP, mieszając w temperaturze pokojowej przez kolejne 30 minut. Po schłodzeniu dodaj 106 mikrolitrów apolipoproteiny A-I i mieszaj w temperaturze pokojowej przez noc, aby utworzyć ostateczny NGF HDL naśladujący NP.