Obrazowanie in vitro w czasie rzeczywistym rozgałęzień aksonalnych w neuronach korowych myszy

Weźmy naczynie do obrazowania ze szklanym dnem zawierające embrionalne neurony korowe myszy.

Umieść naczynie w komorze środowiskowej mikroskopu z kontrastem różnicowym interferencyjnym lub DIC, aby utrzymać żywotność komórek podczas obrazowania.

Mikroskopia DIC rozdziela spolaryzowane światło na dwie wiązki, które przechodzą przez próbkę.

Zmiany współczynnika załamania światła w próbce wprowadzają przesunięcia fazowe między tymi wiązkami.

Kiedy wiązki łączą się ponownie, ich interferencja generuje obraz o wysokim kontraście, dzięki czemu widoczne są drobniejsze struktury komórkowe.

Zidentyfikuj neurony z nierozgałęzionymi aksonami i użyj obrazowania poklatkowego, aby uwidocznić rozgałęzienia aksonów.

Leczenie netryną-1, zewnątrzkomórkową wskazówką prowadzącą, która wiąże się z receptorami aksonalnymi i wyzwala zlokalizowaną egzocytozę.

Pęcherzyki egzocytarne dostarczają składniki błony do miejsc, podczas gdy cytoszkielet jest reorganizowany w celu wsparcia ekspansji błony.

Pod mikroskopem zmiany te pojawiają się jako małe wypukłości, oznaczające początek rozgałęzień aksonów.

Z biegiem czasu wypukłości te rozwijają się w dojrzałe gałęzie aksonów, ilustrujące dynamiczny proces rozwoju neuronó