JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 5:04 min • June 17th, 2025
Zacznij od znieczulonego szczura z wszczepioną kaniulą prowadzącą w odcinku lędźwiowym.
Wprowadzić zespół drutu cewnika przez kaniulę prowadzącą pod kątem do przestrzeni śródoponowej, w której krąży płyn mózgowo-rdzeniowy lub płyn mózgowo-rdzeniowy.
Wyjmij kaniulę prowadzącą i powoli wsuń cewnik głębiej.
Następnie całkowicie usuń przewód i podłącz cewnik do systemu podawania.
Wstrzyknij sterylną sól fizjologiczną do kanału kręgowego, zapewniając czyste przejście.
Powoli podać roztwór badanego związku do płynu mózgowo-rdzeniowego, a następnie przepłukać go sterylnym roztworem soli fizjologicznej.
Odłącz system podawania, odetnij cewnik i zgrzej jego koniec.
Zszyj zgrzewany cewnik do tkanki łącznej, a następnie zamknij skórę nad cewnikiem. Oczyść miejsce i pozwól szczurowi dojść do siebie.
Badany związek rozprzestrzenia się przez płyn mózgowo-rdzeniowy do rdzenia kręgowego i mózgu, które składają się na ośrodkowy układ nerwowy lub OUN.
W obrębie OUN dostaje się do neuronów i oferuje potencjał terapeutyczny.
W celu umieszczenia cewnika i wstrzyknięcia związku zidentyfikuj dwa naturalne wgłębienia między mięśniami nad ogoloną miednicą. I trzymając jedną ręką doły, drugą ręką delikatnie naciśnij i poczuj kręgosłup od kierunku ogonowego do rostralnego, aby zlokalizować pierwsze główne wgłębienie między kręgami. Po zidentyfikowaniu przestrzeni międzykręgowej między kręgami S1 i L6, przesuń się lekko rostralnie, aby zidentyfikować przestrzeń międzykręgową między kręgami L5 i L6.
Użyj skalpela, aby wykonać nie więcej niż 2-centymetrowe nacięcie w skórze i torebce mięśniowej w tym miejscu, wzdłuż linii środkowej od kierunku rostralnego do ogonowego, tak aby miejsce wstrzyknięcia znajdowało się w środku nacięcia. Użyj nożyczek preparacyjnych, aby wypreparować tkankę łączną, aż będzie można uwidocznić warstwę mięśniową. Wykonaj 1-centymetrowe nacięcie w torebce mięśniowej, bezpośrednio po stronie grzbietowego wyrostka rdzeniowego kręgu lędźwiowego L6.
Umieść zespół igły kaniuli prowadzącej w pobliżu przedniej części szóstego kręgu lędźwiowego i wepchnij zespół do przestrzeni międzykręgowej wzdłuż przedniej części szóstego kręgu, tak aby koniec igły penetrował kanał kręgowy.
Użyj kleszczy, aby zlokalizować grzbietowe wyrostki rdzeniowe kręgu lędźwiowego L6. Następnie wepchnij igłę wzdłuż przedniej części szóstego kręgu do przestrzeni międzykręgowej.
Wciśnij kaniulę prowadzącą na miejsce wzdłuż igły. Wyjmij igłę i włóż zespół drutu cewnika do kaniuli prowadzącej. Ustawiając cewnik pod kątem około 45 stopni do kanału kręgowego, wciśnij koniec cewnika na około 0,3 centymetra do kanału.
Usuń drut stylizowany około 2,5 centymetra od śródoponowej końcówki cewnika i wsuń cewnik do kanału kręgowego, aż 2-centymetrowe oznaczenie na cewniku będzie widoczne poniżej mięśnia. Gdy cewnik jest na swoim miejscu, wyjmij kaniulę prowadzącą, aby pozostawić cewnik i drut sztyftowy na miejscu.
Wsuń cewnik do kanału kręgowego, aż oznaczenie 2 centymetrów znajdzie się przy wejściu do kanału i całkowicie wycofaj drut stylizowany. Płyn mózgowo-rdzeniowy może być uwidoczniony wchodzący do wszczepionego cewnika. Następnie podłącz zespół cewnika podającego do dystalnego końca wszczepionego cewnika za pomocą końcówki igły o rozmiarze 30.
Następnie załaduj 60 mikrolitrów sterylnego roztworu soli fizjologicznej do strzykawki o pojemności 100 mikrolitrów i załaduj bolus 30 mikrolitrów badanego związku do drugiej strzykawki. Podłącz strzykawkę z solą fizjologiczną do końcówki adaptera rurki zespołu cewnika doprowadzającego i przepłucz 20 mikrolitrów sterylnego roztworu soli fizjologicznej do przestrzeni dooponowej.
Po przepłukaniu całego roztworu soli fizjologicznej zastąpić strzykawkę z solą fizjologiczną strzykawką z bolusem i wstrzyknąć 30 mikrolitrów badanego związku do przestrzeni dokanałowej przez okres 30 sekund. Po dostarczeniu całego bolusa należy wymienić strzykawkę z bolusem na inną strzykawkę z solą fizjologiczną i przepłukać cewnik dodatkowymi 40 mikrolitrami soli fizjologicznej.
Po dostarczeniu drugiej objętości soli fizjologicznej odłącz zespół cewnika podającego od wszczepionego cewnika i użyj pary bardzo gorących, sterylizowanych koralikami kleszczy preparacyjnych, aby zacisnąć rurkę, aby aseptycznie przeciąć i uszczelnić wszczepiony cewnik. Użyj wchłanialnych szwów monofilamentowych, aby przymocować zgrzewalny cewnik do tkanki łącznej, a następnie użyj szwów niewchłanialnych, aby zamknąć skórę. Następnie użyj gazy i soli fizjologicznej, aby zmyć krew ze skóry i umieść szczura w podgrzewanym inkubatorze z monitorowaniem aż do pełnego leżenia.