Ocena leczenia osoczem pod ciśnieniem atmosferycznym w komórkach nerwiaka zarodkowego pozbawionego glukozy

Weź hodowlę komórek nerwiaka zarodkowego na płytce wielodołkowej z pożywką.

Zastąp pożywki w studzienkach pożywkami neuronalnymi wolnymi od glukozy, aby wywołać stres oksydacyjny.

Umieść płytkę pod dyszą strumienia plazmy w optymalnej odległości, aby uzyskać równomierną ekspozycję.

Wybrane studnie należy potraktować niską dawką strumienia plazmy pod ciśnieniem atmosferycznym na bazie helu (APPJ), który generuje kontrolowane poziomy reaktywnych form tlenu i azotu.

Inkubuj komórki, aby umożliwić aktywację szlaków odpowiedzi na stres i regulację w górę enzymów przeciwutleniających w studzienkach poddanych działaniu APPJ.

Komórki w nieleczonych studzienkach pod wpływem deprywacji glukozy ulegają dalszemu oksydacyjnemu uszkodzeniu komórkowemu.

Dodać odczynnik do oznaczania żywotności komórek i inkubować. Żywe komórki redukują odczynnik do kolorowego produktu.

Zmierz intensywność koloru za pomocą czytnika mikropłytek.

Studzienki poddane działaniu APPJ wykazują zwiększoną intensywność koloru ze względu na wyższą żywotność komórek, podczas gdy studzienki niepoddane działaniu wykazują niższą intensywność, co potwierdza neuroprotekcyjne działanie APPJ w warunkach niedoboru glukozy.

Dostosuj odległość między dyszą rurki kwarcowej a platformą, na której zostanie umieszczona płytka 96-dołkowa, do trzech centymetrów, aby upewnić się, że wiązka może dotykać powierzchni podłoża hodowlanego. Przed poddaniem działaniu należy zmienić pożywkę hodowlaną w każdym dołku na pożywkę RPMI 1640 bez pożywki glukozowej. Teraz umieść płytkę pod dyszą strumienia plazmy pod ciśnieniem atmosferycznym. Następnie traktuj komórki w oddzielnych studzienkach przez 0, 1, 2, 4, 8 i 12 sekund.

Po poddaniu działaniu substancji inkubować komórki przez godzinę w inkubatorze komórkowym w temperaturze 37 stopni Celsjusza, a następnie inkubować w 10 mikrolitrach roztworu Cell Counting Kit 8 do każdej studzienki. Następnie inkubuj komórki w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez cztery godziny. Na koniec zmierz absorbancję przy 450 nanometrach za pomocą czytnika mikropłytek.