Izolacja i oczyszczanie rekombinowanych glikoprotein oligodendrocytów mieliny

MOGtag to rekombinowana glikoproteina oligodendrocytów mieliny połączona ze znacznikami solubilizacji i oczyszczania do eksperymentalnych badań nad autoimmunologicznym zapaleniem mózgu i rdzenia kręgowego.

Aby wyizolować MOGtag, zawieś komórki bakteryjne wykazujące ekspresję MOGtag w buforze do lizy i inkubuj.

Enzymy i detergenty w buforze rozbijają lipidy błonowe i degradują ścianę komórkową.

Sonikacja w celu dalszej lizy komórek, uwalniając nierozpuszczalne ciała inkluzyjne zawierające MOGtag.

Wirówka do granulowania ciał inkluzyjnych. Odrzucić supernatant, ponownie zawiesić osad w buforze i rozpocząć inkubację.

Dodaj chlorowodorek guanidyny, a następnie inkubuj w celu rozpuszczenia MOGtag.

Przenieś rozpuszczalne białka na naładowaną żywicę niklową, wymieszaj i inkubuj z potrząsaniem, aby MOGtag mógł związać się z jonami niklu.

Wirówka do osadzania związanego MOGtag. Usunąć supernatant, ponownie zawiesić osad w buforze elucyjnym i inkubować z wytrząsaniem.

Imidazol w buforze elucyjnym uwalnia MOGtag z żywicy.

Ponownie odwirować, zebrać oczyszczony supernatant zawierający MOGtag i przechowywać go do dalszej analizy.

Rozprowadź kultury równomiernie w 250-mililitrowych butelkach kompatybilny