$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Zacznij od znieczulonego szczeniaka myszy biorcy. Zabezpiecz jego głowę taśmą, upewniając się, że czaszka pozostaje odsłonięta.
Użyj anatomicznej referencyjnej lambdy, aby zlokalizować docelowy obszar mózgu.
Umieścić mikropipetę nad regionem docelowym, załadowaną zawiesiną komórek prekursorowych interneuronów zdolnych do różnicowania się w dojrzałe interneurony.
Te komórki prekursorowe pochodzą z kory, prążkowia lub hipokampa szczeniąt dawcy na tym samym etapie rozwoju co biorca.
Wstrzyknąć zawiesinę do mózgu, aby wykonać przeszczep homotopowy, w którym prekursory są dostarczane do regionu pochodzenia, lub przeszczep heterotopowy, w którym są one wprowadzane do innego obszaru mózgu.
Poczekaj, aż zawiesina rozdyfunduje się przed cofnięciem mikropipety, aby zapobiec przepływowi wstecznemu.
Przenieś szczeniaka na podkładkę rozgrzewającą w celu odzyskania sił.
Można teraz ocenić przeżywalność i dojrzewanie prekursorów dawcy w mózgu młodego biorcy.
Napełnij mikropipetę z cienką końcówką olejem mineralnym. Podłącz mikropipetę do nanolitrowego wtryskiwacza i przymocuj nanolitrowy aparat do wstrzykiwania do manipulatora przymocowanego do podstawy magnetycznej. Podczas gdy pierwsze szczenię jest znieczulane na lodzie, należy kilkakrotnie odpipetować roztwór komórek, aby zapewnić jednorodne rozmieszczenie komórek.
Wysunąć olej mineralny i całkowicie napełnić pipetę zawiesiną jednokomórkową. Po potwierdzeniu braku reakcji na uszczypnięcie palca, umieść szczenię na pokrywie szalki Petriego z głową spoczywającą na klejącej szpachli, tak aby czubek głowy był stosunkowo płaski.
Przykryj głowę kawałkiem taśmy laboratoryjnej z diamentowym otworem, naciągając taśmę na napięcie, aż skóra zostanie rozciągnięta tak, aby głowa była mocno zabezpieczona, a lambda była widoczna przez otwór. Przesuń zabezpieczoną końcówkę pod wtryskiwacz o pojemności nanolitrów i opuść mikropipetę tak, aby końcówka znajdowała się bezpośrednio nad lambdą.
Obserwuj współrzędne x i y na manipulatorze i wyreguluj pokrętła manipulatora, aż mikropipeta zostanie ustawiona w odpowiednich współrzędnych wzdłuż osi przyśrodkowej i przednio-tylnej głowy. Opuścić mikropipetę, aż końcówka utworzy niewielkie wklęsłości na skórze, a następnie mocno, ale delikatnie przekręć pokrętło manipulatora osi z, aby wprowadzić mikropipetę przez skórę i czaszkę do mózgu.
Cofnij lekko mikropipetę, aż końcówka zostanie otoczona stożkiem skóry w kształcie namiotu, a następnie wyświetl współrzędne wzdłuż osi z. Następnie opuścić mikropipetę na odpowiednią głębokość doświadczalną i wstrzyknąć komórki. Odczekać 15 sekund po dostarczeniu komórek przed wycofaniem mikropipety i w razie potrzeby powtórzyć wstrzyknięcie w drugim miejscu. Umieść szczeniaka na poduszce grzewczej i monitoruj, aż zostanie osiągnięte pełne wyzdrowienie przed przeniesieniem z powrotem do klatki domowej.