JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:35 min. • June 17th, 2025
Zacznij od przylegającej hodowli pierwotnych astrocytów myszy na szkiełku nakrywkowym w naczyniu hodowlanym.
Inkubuj za pomocą fluorescencyjnej sondy kwasotropowej, która przechodzi przez nienaruszone błony komórkowe, aby dostać się do astrocytów.
Sonda selektywnie gromadzi się wewnątrz kwaśnych pęcherzyków endolizosomalnych i fluorescencyjnie znakuje pęcherzyki w celu monitorowania ich transportu.
Umyj, aby usunąć nadmiar sondy i dodaj świeże podłoże.
Umieść kulturę pod mikroskopem konfokalnym i skup się na pojedynczej komórce, aby wykonać obrazowanie poklatkowe.
Wizualizuj oznaczony ładunek jako fluorescencyjną punkcję rozmieszczoną w obszarze okołojądrowym,
cytozolu i procesach astrocytowych.
Uchwyć wiele płaszczyzn ogniskowych wzdłuż osi Z, aby zobrazować ładunek w całej trójwymiarowej objętości komórki.
Wykonuj obrazowanie w określonych odstępach czasu, aby śledzić wewnątrzkomórkowy transport ładunku na różnych głębokościach w astrocytach.
Przeanalizuj ruch ładunku, aby odróżnić ładunek stacjonarny, ładunek poruszający się w kierunku obrzeża komórki i ładunek poruszający się w kierunku jądra.
30 minut przed obrazowaniem rozcieńczyć odpowiednią lizosomalną sondę znakującą w 200 mikroli
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych