JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:28 min. • June 17th, 2025
Zacznij od znieczulonej myszy immunokompetentnej z komórkami nowotworowymi wykazującymi ekspresję lucyferazy wszczepionymi w tkankę mózgową.
Myszowi podaje się również lucyferynę, substrat dla enzymu lucyferazy.
Lucyferyna krąży w krwiobiegu, przekracza barierę krew-mózg i dociera do komórek nowotworowych wykazujących ekspresję lucyferazy.
Skonfiguruj system obrazowania z parametrami do pomiaru sygnałów bioluminescencyjnych z komórek nowotworowych wykazujących ekspresję lucyferazy.
Umieść znieczuloną mysz w komorze obrazowania bioluminescencyjnego i uzyskaj obrazy.
Lucyferyna dostaje się do komórki i oddziałuje z enzymem lucyferazy, wytwarzając sygnał bioluminescencyjny proporcjonalny do liczby komórek nowotworowych.
Użyj narzędzia obszaru zainteresowania, aby zdefiniować obszar sygnału i określić ilościowo sygnał bioluminescencyjny.
Aby ocenić wzrost guza, powtórz obrazowanie przez kilka dni i zmierz sygnał luminescencji z tego samego obszaru.
Z biegiem czasu komórki wyrażające lucyferazy zaczynają się namnażać, tworząc glejaka lub guza.
Wzrost sygnałów luminescencyjnych potwierdza wzrost glejaka.
Aby zobrazować wzrost guza wewnątrzczaszkowego, najpierw zainicjuj stację obrazowania, jak właśnie pokazano.
Następnie, po potwierdzeniu odpowiedniego poziomu sedacji przez uszczypnięcie ogona, ustaw parametry systemu obrazowania, jak pokazano poniżej, z wyjątkiem wybrania Auto jako czasu ekspozycji. Gdy system obrazowania jest gotowy, umieść myszy na stacji obrazowania i wybierz opcję Acquire, aby uzyskać obrazy ekspresji lucyferazy. Po pomyślnym uzyskaniu obrazu wybierz narzędzie obszaru zainteresowania z palety narzędzi i Auto z ikony okręgu.
Okrąż obszary sygnału, aby zdefiniować obszary zainteresowania. A następnie uzyskaj pomiary regionów w jednostkach fotonów na sekundę na steradian na centymetr kwadratowy. Na koniec wyjmij myszy z komory obrazowania i monitoruj zwierzęta z guzem, aż w pełni wyzdrowieją.