JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:39 min. • June 17th, 2025
Weźmy szkiełko nakrywkowe z genetycznie zmodyfikowanymi neuronami pierwotnymi w komorze obrazowania wypełnionej buforem do obrazowania.
Komórki te wyrażają fluorescencyjny wskaźnik redoks oparty na białku w macierzy mitochondrialnej.
Umieść komorę pod mikroskopem fluorescencyjnym, zidentyfikuj komórki w świetle widzialnym, a następnie przełącz się na obrazowanie fluorescencyjne.
Zastosuj dwie długości fal wzbudzenia, aby stymulować wskaźnik i zmierzyć emisję fluorescencji.
Współczynnik intensywności fluorescencji przy tych długościach fal odzwierciedla stopień utlenienia mitochondriów.
Wprowadź NMDA, aby aktywować komórkowe receptory NMDA, powodując wewnątrzkomórkowy napływ wapnia.
Wzrost wyzwala mitochondrialny wychwyt wapnia, indukując produkcję ROS i utlenianie mitochondriów
.
ROS utlenia wskaźnik, zmieniając jego fluorescencję i zwiększając współczynnik sygnału.
Wprowadź środki utleniające, aby w pełni utlenić wskaźnik, maksymalizując stosunek sygnału.
Usuń bufor, a następnie wprowadź środki redukujące, aby całkowicie zredukować barwnik, minimalizując stosunek sygnału.
Użyj maksymalnych i minimalnych proporcji sygnału, aby skalibrować i określić ilościowo utlenianie mitochondrialne wywoła
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych